Малышева ольга модель: -, , , -, , :: FashionBank

Ольга Малышева ВКонтакте, Москва, Россия, id4081014

Журнал Erotique — о жанре Ню
Лучшие фотографии в жанре Ню и Эротика #photographer_nu@erotique_journal #models_nu@erotique_journal #portrait_nu@erotique_journal #inspiration@erotique_journal #video_nu@erotique_journal #mk_nu@erotique_journal

Кулинария
Готовить вкусно — легко… с нами! Подписывайтесь друзья!

Beautybook — секреты женской красоты, маникюр
Лучшее для твоей красоты: — Причёски, макияжи, маникюры — Необходимые советы — Всё для ухода за собой

Praxis Group — визуальные коммуникации
В своей массе реклама инфантильна, навязчива и держит людей за идиотов. Вопреки всеобщему мнению, не всем компаниям это нравится. Иногда заказчикам нужно просто сделать хорошо и правильно, а обратиться-то и не к кому — вокруг сплошной креатифф и вирусный маркетинг. Мы же как раз производим стандартные коммерческие продукты для тех клиентов, кому важны имидж и качество, а не дешевая скандальность. Наши типичные клиенты — банки, авиакомпании, строители и страховщики, энергетики и промышленники. С небольшими компаниями тоже работаем, но в портфолио не заявляем. Наша ежедневная работа — это написание сценариев и съемка роликов, создание брендов, упаковки и слоганов, коммерческий дизайн, профессиональные консультации по позиционированию, исследования и копирайтинг. И мы, и наши клиенты чувствуем себя примерно так же, как чистый человек на фестивале красок.

18 НОЯБРЯ | ПРАКТИКУМ MADE IN CHINA | ШАМИЕВ

RONINBEAT
Официальная страница проекта Roninbeat. Roninbeat — одна из популярных электронных групп, играющих танцевальную музыку «живьем» — шаманы каменных джунглей, идущие и ведущие своей тропой, где пункт назначения — свет, одно на всех счастье, где при любом количестве публики они остаются все теми же близкими друзьями, щедро дарящими тепло всем вокруг. Им рады на Сахалине, им рады в Германии и Финляндии. Ходить на их концерты приятно уже только от того, что каждое выступление группы по-своему уникально и наполнено сюрпризами. Их живой перформанс — это то, ради чего все когда-то было задумано. Каждый из участников — состоявшийся музыкант и профи по своей части: Александр Ронин — создатель и идеолог проекта, смиренный проводник из мира гармонии звука в мир людей, открытых для общения на языке, понятном всем и объединяющем всех. Илья Дмитриев — инженер по образованию, и подтвержденному призванию, — человек, органично и мастерски работающий со звуком в реальном времени. Roninbeat много импровизируют на сцене, играя музыку в диапазоне от tech-house до jazzy-funky, но house остается приоритетным в эстетике звучания группы. Успех Roninbeat состоит главным образом в том, что они создали своё оригинальное и узнаваемое звучание, а их выступления всегда максимально интерактивны. За многолетнюю карьеру принимали участие в фестивалях «MAYDAY», «Восточный удар». Выступали вместе с Paul van Dyk, Stephane Pompougnac, Westbam, ТОК ТОК, Takkuy Ishino, Lexy & K-Paul, играли на одной сцене вместе легендарными FAITHLESS. Именно питерский дуэт выбрали именитые музыканты для своего выступления в Ледовом Дворце. Roninbeat – это всегда мощная и живая энергетика. Одно питерское издание как-то написало о нас: «Ребята исполняют все свои песни вживую, выступают на фестивалях и гастролируют по миру. Под музыку коллектива хочется танцевать, петь и радоваться жизни, а все это благодаря двум участникам — Александру Ронину и Илье Дмитриеву». _____________________

Александр Ронин (музыка, концерты)
Официальная страница творчества Александра Ронина. Музыкант, автор и исполнитель из Санкт Петербурга. C 2001 года активно влился в процесс музыкального творчества и исполнительской деятельности. Вместе с Ильёй Дмитриевым создал проект Roninbeat где является автором музыки и русскоязычных текстов. Так же является автором музыкальных проектов «Саша Ронин» и «Local Spirit». Все три проекта являют собой разность музыкальных стилей. Участвовал во многих фестивалях и перформансах, активно выступал и продолжает выступать на площадках Питера и других городов.. Имеет за плечами широкую гастрольную деятельность в России и в городах Европы. Ронин — это гитарная музыка, где смысл текстов не на последнем месте, где умение играть в живую тесно переплетается с умением передать атмосферу времени, объединившего электронику и весь исторический экскурс звукотворчества. Почти осязаемый благородный флёр идеологии Северной столицы, отсутствие навязчивости и тонкая мужская лирика — вот составляющие эмоционального фона, в который погружаешься на его выступлениях.

Fox Sisters | Букеты Цветочные и Съедобные Спб
🦊Креативные букеты, которые удивляют. Работаем с 2016 года. Доставка в любой уголок Питера. Корпоративные заказы — vk.me/foxsisters 🙂 Для тех, кто любит: — креативность. — настоящие эмоции. — фееричные подарки. 🌿 Что в букетах? — самые свежие цветы — бомбические овощи и фрукты. — говорим «нет» безвкусице, полиэтилену и блёсткам. Заказать свой креативный букет — vk.me/foxsisters 8 950 047 444 7 | Дарья 🚗 Доставка. Мы всегда стараемся сделать доставку в удобное для тебя время. Курьеры работают по Санкт-Петербургу и Лен. области. Стоимость от 300р. 📌 Сроки заказа. Лучший букет – свежий букет. Чтобы найти свежие ингредиенты для букета, нужно много времени. Заказываем за 48 часов. А те, кто бронирует на определённую дату заранее (хоть за месяц) – большие молодцы. Яркого вам дня! Фыр-фыр-фыр 🦊

Уголок Дизайна

Делитесь своим ремонтом/интерьером/рукоделием Жмите снизу «предложить новость» 👇 Крутые работы попадают на стену 🙌

Лучшие фотографы и модели | Искусство
Сообщество, посвященное фотографам и моделям. У нас вы найдете красивые фотографии со всех уголков мира. Природа, животные, люди. Только отборные фотографии.

Студия танца Ивара: Хастл, Танго, Бачата, Буги
💥 Начни танцевать вместе с нами! Запишись в группу прямо сейчас 👉 vk.cc/atxuV0 Ивара – это: 👉 крупнейшая студия в Москве, обучающая современным парным танцам 👉 5 уровней подготовки танцоров: с «нуля» до Main-класса, 👉 самый большой ТОПовый состав преподавателей vk.cc/a3ZgmJ 👉 3 крутых современных студии в центре Москвы vk.cc/a3Zh57 👉 регулярные вечеринки, мероприятия и клубные тусовки. Мы учим танцевать: — Хастл — West coast swing — Клубный рок-н-ролл (буги-вуги) — Бачату — Кизомбу — Аргентинское танго Обучение этим танцам не требует специальной подготовки. Как и в любом деле, главное — это желание научиться. Записывайся уже сейчас и вливайся в яркую тусовку города. Ведь парные танцы в Москве танцуют тысячи людей! Наши странички в соцсетях: — youtube.com/IvaraStudio — instagram.com/ivara.studio — facebook.com/IvaraStudio — telegram.me/ivaraparty Наши хэштеги: #Ивара #яЛюблюИвару #ivara Присоединяйтесь 🙂

Declic Revue. Журнал о фотографии
Мы публикуем актуальные новости от фотографов и моделей С-Петербурга и Москвы, а также других городов. Лучшие фотографии и видео. Следим за трендами. Публикуем лучшее. РЕКЛАМА — 400руб/пост 950руб — 3 поста

Насмотренность
Сообщество тех, кому не все равно, на что смотреть. ▪️ Смотреть регулярно: 1 день — 1 фото. ▪️ Смотреть лучших: классики и современные мастера. ▪️ Смотреть шире: фотография и другие визуальные искусства.

ДЕННИ-РОУЗ.рф фирменный магазин DENNY ROSE
Фирменный интернет-магазин, выбравший основным направлением деятельности продажу женской одежды модного итальянского бренда DENNY ROSE®. Мы рады представить Вам весь ассортимент #бренд DENNY ROSE®. Мы работаем на территории России и СНГ.

Фотограф MARZAVA.COM
Настоящая фотография – это живая фотография, снимок, вызывающий эмоции, если хотите, страсть. В основе хорошей работы всегда лежит желание сделать работу хорошо. В основе творчества всегда лежит интерес к объекту творчества. Я интересуюсь, вдохновляюсь тем, что фотографирую, иначе мне б не удалось сотворить мои работы:) с ув. Оля Малярчук делаю сьемки в других странах Дубай и Бали в эти даты

Vassa Jassa & Vika Wood. Фотодни.
Мы работаем в тандеме — фотограф и визажист. Эта страница посвящена нашим фотодням которые мы проводим!

Grace-models
➡ Хочешь стать моделью нашего агентства? Присылай свои снепы на почту [email protected] или заполни форму на http://www.grace-models.com/become_a_model.html Требования: от 13 до 22 лет, рост от 172см. ➡ По вопросам сотрудничества: — [email protected] — [email protected] ***

★★★Умный Туризм★★★ Активный отдых и туры.
10 причин, почему выбирают активный отдых! Активный отдых – это метод проведения свободного времени, который подразумевает физическую нагрузку, в результате которого человек получает неимоверное удовольствие от прилива сил и энергии. И так, все же почему мы должны отдать предпочтение активному отдыху, забыв о горячем песочке и удобном лежаке? Активный отдых – это двигательная активность человека, приводящая к работоспособности всех мышц и системы органов, и как следствие бодрое настроение и замечательное самочувствие. Все виды ведения активного отдыха по сути своей являются элементами здорового образа жизни. Занятие активным отдыхом – это не только стимуляция мышц, но это еще и масса позитивных эмоций. Ведь даже самые маленькие победы, завоеванные в результате отдыха, станут причиной радость и, несомненно, гордости. Вам знаком выплеск адреналина? Если нет, но вы всегда мечтали это испытать, то вам непременно стоит выбрать именно активный отдых. Выплеснув, хоть раз, вам захочется повторить это снова и снова. Во время активной деятельности вы делаете акцент больше на физические нагрузки. Это позволяет вам разгрузить мозг и морально отдохнуть. Кроме того, активный отдых это всегда отдых на природе, на свежем воздухе и на солнце, а эти факторы, как мы знаем, существенно укрепляют иммунитет и поднимают настроение. Вопреки всем стереотипам, активный отдых подходит для абсолютно всех возрастных категорий. Родители могут взять в поход своих малышей, да и людям в возрасте такой отдых придется по душе. Ориентируясь на свои силы, вы можете выбрать сложность активного отдыха и его степень экстремальности. Активный туризм дает возможность исследовать и познавать мир вокруг нас, особенно дикую природу, где редко ступает нога человека. Кроме этого, вы можете сделать замечательные снимки, которые станут в ряд лучших домашних фото. В активном отдыхе, есть такое направление, как коллективный отдых. Наличие коллективного активного отдыха позволяет сплотить коллектив и помогает, в некоторой степени, развитию бизнеса. И потом, сегодня очень модно, иметь свое хобби, особенно, если это хобби одно из разновидностей активного отдыха.

Наука КнАГУ

Кол-во: 19

Сортировка

Дата Автор Тема

Талалова Лариса Николаевна — Государственный университет управления

ЗЕЛЕНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНЕРГИИ: КТО ПОБЕДИТ В БОРЬБЕ ЗА ЛИДЕРСТВО?

Статус Принят к публикации

Валиуллин Камиль Рафкатович — ФГБОУ ВО» Оренбургский государственный университет»

ИМИТАЦИОННОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ГОЛОЛЕДНО-ИЗМОРОЗЕВЫХ ОТЛОЖЕНИЙ НА ПАРАМЕТРЫ ВЧ-ТРАКТА РЕЛЕЙНОЙ ЗАЩИТЫ

Статус Принят к публикации

Лысов Николай Андреевич — КнАГУ

АНАЛИЗ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПОЛИМЕРНЫХ МАТЕРИАЛОВ В ЭЛЕКТРОПРИВОДЕ ВОЗДУШНОГО КОМПРЕССОРА РОБОТИЗИРОВАННОГО КОМПЛЕКСА

Статус Принят к публикации

Размыслов Валерьян Александрович — Комсомольский-на-Амуре государственный университет

РАЗДЕЛЕНИЕ ПОТЕРЬ В КОРОТКОЗАМКНУТОМ АСИНХРОННОМ ДВИГАТЕЛЕ ПО КАТАЛОЖНЫМ ДАННЫМ

Статус Принят к публикации

Размыслов Валерьян — Комсомольский-на-Амуре государственный университет

УМЕНЬШЕНИЕ ПОТЕРЬ В СИЛОВЫХ ТРАНСФОРМАТОРАХ

Статус Принят к публикации

Алексюк Ольга Эдуардовна — ФГБОУ ВО «Комсомольский-на-Амуре государственный университет»

ТЕПЛОВИЗИОННЫЙ КОНТРОЛЬ ТРАНСФОРМАТОРНОГО НАГРЕВАТЕЛЯ ДЛЯ РАДИАТОРОВ ОТОПЛЕНИЯ

Статус Принят к публикации

Макаренко Виктор Антонович — КнАГУ

«СТРЕЛОЧНЫЙ ПЕРЕВОД С СОВМЕЩЕННЫМ ЭЛЕКТРОПРИВОДОМ»

Статус Принят к публикации

Soe Htut Myat Than — Defence services academy, Pyin Oo Lwin, Republic of the Union of Myanmar

ИМИТАЦИОННАЯ МОДЕЛЬ АСИНХРОННОГО ГЕНЕРАТОРА БЕСКОНТАКТНОГО ВОЗБУЖДЕНИЯ

Статус Принят к публикации

Лосев Денис Яковлевич — ФГБОУ ВО «Тюменский Индустриальный Университет»

СРАВНИТЕЛЬНО-ЭКОНОМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ТЕСТОВОЙ ВЕТРОУСТАНОВКИ «ОБЪЕКТ 1-У»

Статус Принят к публикации

Федосов Денис Сергеевич — ФГБОУ ВО «Иркутский национальный исследовательский технический университет»

АВТОМАТИЗАЦИЯ СНЯТИЯ ХАРАКТЕРИСТИКИ СРАБАТЫВАНИЯ РЕЛЕ СОПРОТИВЛЕНИЯ ДЛЯ ВЕРИФИКАЦИИ МАТЕМАТИЧЕСКОЙ МОДЕЛИ ДИСТАНЦИОННОЙ ЗАЩИТЫ

Статус Принят к публикации

Ербулатов Павел Александрович — Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Комсомольский-на-Амуре государственный университет»

ЭЛЕКТРОМЕХАНИЧЕСКАЯ СИСТЕМА ГЕНЕРИРОВАНИЯ ЭНЕРГИИ НА БАЗЕ ВЕТРОГЕНЕРАТОРА

Статус Принят к публикации

Малышева Ольга Александровна — ФГБОУ ВО «Дальневосточный государственный университет путей сообщения»

РАЗРАБОТКА ДИСКРЕТНЫХ МОДЕЛЕЙ ФОРМИРОВАНИЯ ТЕКУЩИХ И ФИКСИРОВАННЫХ ЗНАЧЕНИЙ ГАРМОНИЧЕСКОГО СИГНАЛА ПРИ ВОЗНИКНОВЕНИИ НАБРОСОВ НАГРУЗКИ И ОДНОФАЗНОГО КОРОТКОГО ЗАМЫКАНИЯ В СЕТИ

Статус Принят к публикации

Лисовский Вячеслав Витальевич — ФГБОУ ВО «Амурский государственный университет»

СИСТЕМНЫЙ АНАЛИЗ ЭЛЕКТРИЧЕСКИХ СЕТЕЙ С РАСПРЕДЕЛЕННОЙ ГЕНЕРАЦИЕЙ

Статус Принят к публикации

Лисогурский Иван Александрович — ФГБОУ ВО «Амурский государственный университет»

ТЯГА ПЕРЕМЕННОГО ТОКА, КАК ИСТОЧНИК СНИЖЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ И НАДЕЖНОСТИ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ЭЛЕКТРИЧЕСКИХ СЕТЕЙ

Статус Принят к публикации

Рыдалина Наталья Владимировна — Тюменский индустриальный университет

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОРИСТЫХ МЕТАЛЛОВ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТЕПЛООБМЕННЫХ АППАРАТОВ В ТЕПЛОЭНЕРГЕТИКЕ

Статус Принят к публикации

Игнатенко Иван Владимирович — ДВГУПС

ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ ТЕХНОЛОГИИ ОБМЕНА ИНФОРМАЦИЕЙ ЦИФРОЙ ТЯГОВОЙ ПОДСТАНЦИИ

Статус Принят к публикации

Тряпкин Евгений Юрьевич — ДВГУПС

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ АЛГОРИТМОВ ОМП В ТЯГОВОЙ СЕТИ 25 КВ

Статус Принят к публикации

Демина Людмила Сергеевна — ДВГУПС

ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ АВТОМАТИЗАЦИИ ПРОЦЕССОВ ДЕФЕКТИРОВАНИЯ ПОВРЕЖДЕНИЙ В ОПОРАХ КОНТАКТНОЙ СЕТИ

Статус Принят к публикации

Кузьмин Роман Вячеславович — КнАГУ

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОБИЛЬНЫХ И ПРОТОЧНЫХ МИКРОГЭС ДЛЯ НУЖД АВТОНОМНЫХ ПОТРЕБИТЕЛЕЙ

Статус Принят к публикации

Малышева, Садальский, Киркоров: кто пришел проститься с Грачевским

Малышева, Садальский, Киркоров: кто пришел проститься с Грачевским

close

Церемония прощания с художественным руководителем «Ералаша» Борисом Грачевским в Доме кино, 17 января 2021 года Вдова художественного руководителя «Ералаша» Бориса Грачевского Екатерина Белоцерковская во время церемонии прощания с режиссером в Доме кино, 17 января 2021 года Сын художественного руководителя «Ералаша» Бориса Грачевского бизнесмен Максим Грачевский во время церемонии прощания, 17 января 2021 года Дмитрий Дибров с супругой у Дома кино перед началом церемонии прощания с художественным руководителем «Ералаша» Борисом Грачевским, 17 января 2021 года Телеведущая Елена Малышева перед началом церемонии прощания с художественным руководителем «Ералаша» Борисом Грачевским в Доме кино, 17 января 2021 года Актриса Ольга Кабо во время церемонии прощания с художественным руководителем «Ералаша» Борисом Грачевским в Доме кино, 17 января 2021 года Телеведущий Леонид Якубович (в центре) во время церемонии прощания с художественным руководителем «Ералаша» Борисом Грачевским в Доме кино, 17 января 2021 года Актер Станислав Садальский на церемонии прощания с создателем детского юмористического киножурнала «Ералаш», режиссером Борисом Грачевским в Доме кино в Москве, 17 января 2021 года Художник Никас Сафронов во время церемонии прощания с художественным руководителем «Ералаша» Борисом Грачевским в Доме кино, 17 января 2021 года Председатель комиссии Мосгордумы по культуре, актер Евгений Герасимов во время церемонии прощания с художественным руководителем «Ералаша» Борисом Грачевским в Доме кино, 17 января 2021 года Телеведущий Владимир Долинский с супругой у Дома кино, где проходит церемонии прощания с художественным руководителем «Ералаша» Борисом Грачевским, 17 января 2021 года Певец Бедрос Киркоров во время церемонии прощания с художественным руководителем «Ералаша» Борисом Грачевским в Доме кино, 17 января 2021 года Церемония прощания с создателем детского юмористического киножурнала «Ералаш», режиссером Борисом Грачевским в Доме кино в Москве, 17 января 2021 года Поэт Владимир Вишневский во время церемонии прощания с художественным руководителем «Ералаша» Борисом Грачевским в Доме кино, 17 января 2021 года Владимир Левкин с супругой во время церемонии прощания с художественным руководителем «Ералаша» Борисом Грачевским в Доме кино, 17 января 2021 года Вдова художественного руководителя «Ералаша» Бориса Грачевского актриса Екатерина Белоцерковская и его сын Максим Грачевский у Дома кино во время церемонии прощания с художественным руководителем «Ералаша» Борисом Грачевским, 17 января 2021 года Церемония прощания с создателем детского юмористического киножурнала «Ералаш», режиссером Борисом Грачевским в Доме кино в Москве, 17 января 2021 года В Москве проходит церемония прощания с художественным руководителем «Ералаша» Борисом Грачевским. Он скончался 14 января в больнице от осложнений, вызванных коронавирусом. Проводить Грачевского в последний путь в московский Дом кино пришли друзья, коллеги и поклонники. Среди участников траурной церемонии — Елена Малышева, Ольга Кабо, Дмитрий Дибров, Леонид Якубович, Бедрос Киркоров, Владимир Левкин и многие другие.

Как проходит церемония прощания — в нашей фотогалерее.

Четыре героини Tatler в интервью о здоровом образе жизни (ЗОЖ)

Оля, как давно вы стали вегетарианкой?

13 лет назад я отказалась от мясных продуктов — мне тогда было 19. У меня был опыт веганства и сыроедения, но я вернулась к молочным продуктам и яйцам. С этими продуктами я чувствую больше насыщения, и что особенно важно — я реже думаю о еде в течение дня. Не отношу молочные продукты к полезным, скорее они помогают мне вносить разнообразие в рацион, делают более интересными текстуру и вкус блюд. Если есть выбор, я покупаю сыр, творог и йогурты из козьего молока.

В чем-то еще себя ограничиваете?

Минимизирую в своём рационе рафинированный сахар, рафинированную муку, соевые продукты, не пью кофе и алкоголь. Стараюсь исключать глютен, но раз в две недели могу с удовольствием съесть обычную пиццу в хорошем ресторане. Я не ярый противник глютена, но действительно чувствую себя лучше, когда в моём рационе минимум мучного. Пищеварение работает лучше, чувствую больше бодрости и вообще не вспоминаю о существовании головных болей. В целом всегда стараюсь выбирать продукты из цельных ингредиентов — между хлебом из рафинированной рисовой муки с пометкой gluten free и хлебом из пророщенной пшеницы, где есть глютен, выберу второй вариант.

У вас маленькая дочь. Расскажите, какой рацион у нее и как вы питались во время беременности.

Я слышала много историй о том, как убежденные веганы становятся мясоедами во время беременности. Так что с самого начала я решила, что буду разрешать себе все, что мой организм захочет. Но кроме пиццы раз в неделю ничего особенного мне не хотелось. Разве что чаще ела яйца и сами порции стали немного больше. Но в целом мой рацион оставался таким же, каким был до беременности — преимущественно растительным с большим количеством овощей, фруктов и зелёных соков. То же самое было и во время грудного вскармливания.

Моей дочери сейчас два с половиной года. Дома мы не едим мясо. Но если мы в кафе или в гостях и она хочет попробовать мясные продукты, я отношусь к этому спокойно. Я против фанатизма и никогда не буду ругаться с родственниками, которые на семейном обеде предлагают ей мясо. Дома дочка ест много овощей, фруктов, цельные крупы, рыбу, яйца и продукты из козьего молока.

Что в вашей продуктовой корзине? Что всегда есть в холодильнике?

Свежие фрукты, овощи, зелень. Всегда есть цельные крупы — гречка, киноа. Очень любим дикий рис, а еще чечевицу и разные бобовые. Часто готовим фунчозу. Для быстрого ужина — макароны из цельной органической пшеницы или без глютена. Дома всегда есть несколько видов цельнозерновой муки — кукурузная, полбяная, нутовая, кокосовая, миндальная. И всегда есть замороженные ягоды для смузи и орехи, чтобы делать ореховое молоко, на основе которого мы потом делаем смузи. Авокадо! Если его нет — это сигнал, что надо идти в магазин. И, конечно, лимон, потому что представить утро без воды с лимоном уже невозможно.

Обыграть зиму: Ольга Малышева в специальном проекте Nike и Buro 24/7

В преддверии наступления суровой московской зимы Buro 24/7 и Nike решили отыскать несколько героев, которых вполне можно считать ролевыми моделями в борьбе с повсеместной серостью

Создательница блога Salatshop Ольга Малышева доказала, что заразителен не только дурной, но и положительный пример. Тысячам читателей девушка рассказывает, как вести здоровый образ жизни, не ограничивая свой день исключительно приготовлением смузи и йогой. В рамках совместного проекта Nike и Buro 24/7 Ольга дала еще несколько практичных советов. 

Когда ты увлеклась темой правильного питания и здорового образа жизни в целом?
В 18 лет я пошла заниматься йогой при посольстве Индии. Тогда это еще не было чем-то модным: со мной в зале находились бабушки и дедушки с простынями вместо ковриков, а преподаватель ни слова не понимал по-русски. Но мне йога сразу понравилась. Больше всего меня тогда вдохновили изменения не в теле, а в характере. Выходишь из зала промозглой осенью, и все вокруг кажется не таким уж унылым, наоборот — классным! Постепенно стала углубляться в эту тему, интересоваться разными системами питания. В итоге отучилась у известного нью-йоркского гуру детокса Наталии Роуз и получила диплом специалиста по детоксу.

В какой момент появился блог Salatshop?
Знакомые и друзья стали все чаще задавать вопросы: что есть, что не есть, как приготовить? Сначала я каждому отвечала, а потом решила писать об этом в блоге, чтобы всех знакомых «отправлять» туда.

Рассчитывала, что он станет настолько популярным?
Совсем не рассчитывала, просто делилась своим опытом в максимально доступной для читателей форме. И когда у блога было 300 подписчиков в Facebook, мне казалось, что это уже успех! Сначала я не занималась Salatshop так серьезно. У меня была постоянная работа в рекламном агентстве, где я придумывала слоганы для водочных брендов и другой не самой полезной продукции.

Неожиданно.
Да, ощущения были странные. В блоге я пишу о пользе зеленых смузи, а в офисе работаю на алкогольные бренды. Постепенно я пришла к тому, что мое увлечение стало профессией. Сейчас занимаюсь разработкой детокс-программ, провожу семинары о питании, а в этом году мы наконец запустили линейку продуктов 365 Detox.

Многие люди жалуются на детокс-программы, потому что не понимают, как можно выжить на соках в городских условиях…

Так кажется только первое время, когда начинаешь менять свои питание и образ жизни, но затем втягиваешься, ценишь появившееся чувство легкости, и есть мучное и жирное уже совсем не хочется. Выбор на самом деле большой: пить одни соки не обязательно, а кому-то и нежелательно. Достаточно просто включать соки и смузи в повседневный рацион. Готовить их вы можете сами, а начать всегда можно с того, чтобы вводить в питание больше фруктов и овощей, минимизируя мучное и сахар.

Какая роль отведена спорту в здоровом образе жизни?
Движение — жизнь, но здесь очень важен баланс. Зачастую люди решают с понедельника начать новую жизнь и сразу настраиваются на марафон. Здоровью это не всегда идет на пользу. Сейчас я хожу на йогу два раза в неделю, каждое утро начинаю с зарядки и в любую погоду стараюсь ходить пешком по 30—40 минут. Часто мы забываем, что помимо занятий в фитнес-клубе есть еще баскетбол, пинг-понг, коньки, лыжи и куча других активностей, которыми можно заниматься вместе с друзьями.

Зимняя Москва олицетворяет уныние. Дай пару советов, как его пережить.
Многие с приходом зимы включают в рацион больше тяжелой пищи, хотя большинство городских жителей редко бывают на морозе: чаще в теплых квартирах, машинах и офисах, — поэтому кардинально менять рацион не обязательно. Тяжелые продукты вгоняют в спячку и только прибавляют уныния. Наоборот, чем больше овощей, зелени и фруктов, тем бодрее и веселее! Проверено на себе.

А где лучше всего веселиться зимой?
На катке! Мечтаю в этом году наконец купить коньки и рассекать по Парку Горького и ВДНХ. Еще очень классно греться в бане или сауне. И, конечно, зима — идеальное время для домашних вечеринок с друзьями и семейных обедов. Запечь побольше овощей, приготовить полезный десерт, включить любимую музыку — и о наличии мороза за окном никто не вспомнит.

Фото: Арсений Джабиев
Продюсер: Уля Мамедова 
Прическа и макияж: Legend New York 

Модель коммуникации «Говорящий — Слушающий» в условиях цифровизации лингвистического поворота: опыт сетевого и лингводискурсивного анализа контента видеохостинга «YouTube» | Рябченко

1. «вДудь» : официальный канал Юрия Дудя. — URL: https://www.youtube.com/c/vdud/about (дата обращения: 13.11.2020). — Видео + Текст : электронный.

2. «YouTube Rewind 2019: лайки, челленджи и Билли Айлиш». Отчет компании «Google». — URL: http://www.advertology.ru/article148162.htm (дата обращения: 13.11.2020). — Текст : электронный

3. Беслан. Помни / Beslan. Remember (english & español subs). — URL: https://www.youtube.com/watch?v=vF1UGmi5m8s (дата обращения: 13.11.2020). — Видео : электронное.

4. Витгенштейн, Л. Избранные работы / Л. Витгенштейн ; пер. с нем. и англ. В. Руднева. — Москва : Территория будущего, 2005. — Текст : непосредственный.

5. Витгенштейн, Л. Логико-философский трактат / Л. Витгенштейн. — Текст : непосредственный // Философские исследования. Ч. 1 / Л. Витгенштейн. — Москва : Гнозис, 1994. — С. 1—74.

6. Катермина, В. В. Лингвистическая модель коммуникации президента США Д. Трампа в социальной сети Twitter в марте — июне 2020 г. / В. В. Катермина, Н. А. Рябченко, С. Х. Липириди, А. А. Гнедаш, О. П. Малышева. — Текст : непосредственный // Политическая лингвистика. — 2020. — Вып. 5 (83). — С. 87—107. — DOI: 10.26170/pl20-05-09.

7. Киященко, Л. П. В поисках исчезающей предметности (очерки о синергетике языка) / Л. П. Киященко. — Москва : ИФРАН, 2000. — 199 с. — Текст : непосредственный.

8. Крипке, С. Тождество и необходимость / С. Крипке. — Текст : непосредственный // Новое в зарубежной лингвистике. Вып. XIII. Логика и лингвистика (Проблемы референции). — Москва : Радуга, 1982. — С. 340—376.

9. Мещеряков, Б. Большой психологический словарь / сост. и общ. ред.: Б. Мещеряков, В. Зинченко. — СанктПетербург : Прайм-ЕВРОЗНАК, 2004. — 672 с. — Текст : непосредственный.

10. Равочкин, Н. Н. Лингвистический поворот: социальнофилософский потенциал / Н. Н. Равочкин. — Текст : непосредственный // Интеллект. Инновации. Инвестиции. — 2018. — № 8. — С. 70—74.

11. Романовский, Н. В. О современном этапе развития социологии. — URL: http://ecsocman.hse.ru/data/142/878/1219/005_Romanovskij_22-31.pdf (дата обращения: 13.11.2020). — Текст : электронный.

12. Рябченко, Н. А. Политический контент социальных движений в online-пространстве современных государств: методология анализа и исследовательская практика / Н. А. Рябченко, В. В. Катермина, А. А. Гнедаш, О. П. Малышева. — Текст : непосредственный // Южно-российский журнал социальных наук. — 2018. — № 3. — С. 139—162.

13. Рябченко, Н. А. Управление политическим контентом в социальных сетях в период предвыборной кампании в эпоху постправды / Н. А. Рябченко, О. П. Малышева, А. А. Гнедаш. — Текст : непосредственный // Полис. Политические исследования. — 2019. — № 2. — С. 92—106. —https://doi.org/10.17976/jpps/2019.02.07.

14. ТОП-10 Ресурсов по данным компании «Mediascope». — URL: https://webindex.mediascope.net/top-resources (дата обращения: 13.11.2020). — Текст : электронный.

15. Bazerman, C. From cultural criticism to disciplinary participation: Living with powerful words / C. Bazerman. — Text : unmediated // Writing, Teaching, and Learning in the Disciplines / Herrington A. and C. Moran (eds.). — New York : Modern Language Association of America, 1992. — Р. 61—68.

16. Becher, T. Disciplinary discourse / T. Becher. — Text : unmediated // Studies in Higher Education. — 1987. — № 12 (3). — Р. 261—274.

17. Clifford, J. Writing Culture: The Poetics and Politics of Ethnography / J. Clifford, G. Marcus. — Berkeley : University of California Press, 1986. — Text : unmediated.

18. Habermas, J. On the Prag atics of Social Interaction: Preliminary Studies in the Theory of Communicative Action / J. Habermas. — Cambridge : MIT Press, 2001.

19. Katermina, V.V. Political content management: new linguistic units and social practices / V. V. Katermina, N. A. Ryabchenko, O. P. Malysheva. — Text : unmediated // Church, Communication and Culture. — 2019. — Vol. 4, Iss. 3. — P. 305— 322. — DOI: 10.1080/23753234.2019.1664916.

20. Kelly, G. J. The sound of music: constructing science as sociocultural practices through oral and written discourse / G. J. Kelly, C. Chen. — Text : unmediated // Journal of Research in Science Teaching. — 1999. — № 36 (8). — Р. 883—815.

21. Kluckhohn, С. Notes on some anthropological aspects of communication / C. Kluckhohn. — Text : unmediated // American Anthropologist. New Series. — 1961. — Vol. 63. № 5. — Р. 895— 910. — DOI: https://doi.org/10.1525/aa.1961.63.5.02a00010.

22. Kripke, S. A. Naming and Necessity / S. A. Kripke. — Cambridge : Harvard University Press, 1980. — 172 p. — Text : unmediated.

23. Lea, M. R. Academic literacies in theory and practice / M. R. Lea. — Text : unmediated / Encyclopedia of Language and Education // N. Hornberger, B. Street (eds.). — New York : Springer, 2008. — Р. 634—645.

24. Lea, M. R. The academic literacies model: Theory and applications / M. R. Lea, B. V. Street. — Text : unmediated // Theory into Practice. — 2006. — № 45 (4). — Р. 368—377.

25. Rieder, B. YouTube Data Tools (Version 1.11) [Software] /B. Rieder. — URL: https://tools.digitalmethods.net/netvizz/youtube/ (date of access: 13.11.2020). — Software : electronic.

26. Rorty, R. M. (ed.) The Linguistic Turn: Essays in Philosophical Method / R. M. Rorty (ed.). — Chicago : University of Chicago Press, 1992. — Text : unmediated.

27. Said, E. Orientalism / E. Said. — New York : Pantheon, 1978. — Text : unmediated.

28. Williams, R. Marxism and Literature / R. Williams. — Oxford : Oxford University Press, 1977. — Text : unmediated.

29. Wittgenstein, L. Culture and Value / L. Wittgenstein ; G. H. von Wright (ed.), P. Winch (trans.). — Oxford : Blackwell, 1980. — 195 p. — Text : unmediated.

Малышева Ольга Викторовна

Повышение квалификации и (или) профессиональная переподготовка

Курс «Навигация, консультирование родителей, воспитывающих детей с разными образовательными потребностями и оказание им информационно- методической помощи»

ГОУ МО ВО «Государственный гуманитарно-технологический университет»

часов — 72 , год окончания 2020

Курс «Первая помощь в образовательной организации»

АНО ДПО «Среднерусская академия современного знания»

часов — 72 , год окончания 2020

Курс «Профилактика коронавируса, гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций»

ООО»Центр инновационного образования и воспитания»

часов — 16 , год окончания 2020

Курс «Особенности работы организации дошкольного образования в условиях сложной санитарно-эпидемиологической обстановки»

ООО «НПО ПРОФЭКСПОРТСОФТ»

часов — 72 , год окончания 2020

Курс «Эффективное управление дошкольными образовательными учреждениями в условиях модернизации дошкольного образования»

МГОГИ

часов — 72 , год окончания 2019

Курс «Педагогика раннего возраста»

ГОУ МО ВО «Государственный гуманитарно-технологический университет»

часов — 72 , год окончания 2019

Курс «Психолого-педагогические условия развития детей в ходе реализации ФГОС ДО»

ФГБНУ «Институт изучения детства, семьи и воспитания Российской академии образования»

часов — 72 , год окончания 2019

Курс «Модели государственно – общественного управления образованием в условиях реализации Федерального закона от 29.12.2012 г. № 273 – ФЗ «Об образовании в Российской Федерации»»

Национальный исследовательский университет «Высшая школа экономики»

часов — 72 , год окончания 2018

Курс «Адаптированная основная образовательная программа дошкольного образования: особенности разработки и реализации»

ФГБНУ «Институт изучения детства, семьи и воспитания РАО»

часов — 72 , год окончания 2018

Курс «Профессиональный контрактный управляющий в сфере закупок, товаров, услуг для обеспечения государственных и муниципальных нужд»

АНО «Институт профессиональных контрактных управляющих»

часов — 280 , год окончания 2017

Курс «Реализация инновационных образовательных программ в ДОО: планирование, практика, контроль»

ГОУ МО ВО «Государственный гуманитарно-технологический университет»

часов — 72 , год окончания 2017

Курс «Приоритеты воспитания и обучения ребенка в едином пространстве развития «семья-детский сад-начальная школа» в контексте ФГОС»

ГОУ МО ВО «Государственный гуманитарно-технологический университет»

часов — 72 , год окончания 2016

Курс «Игра и игровые практики детей в условиях реализации ФГОС ДО»

ФГНУ «Институт психолого-педагогических проблем детства» РАО

часов — 72 , год окончания 2016

Курс «Научно – методическое обеспечение дошкольных организаций в период перехода на ФГОС ДО»

ГОУ МО ВО «Государственный гуманитарно-технологический университет»

часов — 18 , год окончания 2015

Курс «Контрактная система в сфере закупок товаров, работ и услуг. Управление закупками»

ФГБОУ ДПО «Институт развития дополнительного профессионального образования»

часов — 120 , год окончания 2015

Ольга Малышева — Russianstars

Ольга Малышева — Russianstars перейти к содержанию Архивы Выберите месяц Август 2021 (83) Июль 2021 (84) Июнь 2021 (91) Май 2021 (129) Апрель 2021 (138) Март 2021 (183) Февраль 2021 (167) Январь 2021 (144) Декабрь 2020 (309) Ноябрь 2020 ( 213) октябрь 2020 (234) сентябрь 2020 (152) август 2020 (270) июль 2020 (116) июнь 2020 (109) май 2020 (159) апрель 2020 (141) март 2020 (108) февраль 2020 (60) январь 2020 ( 25) декабрь 2019 (134) ноябрь 2019 (116) октябрь 2019 (226) сентябрь 2019 (83) август 2019 (293) июль 2019 (205) июнь 2019 (405) май 2019 (512) КатегорииВыбрать категориюАдель Вакула (1) День Аделины (2) Адриана Феррари (5) Аида Имамвердива (2) Эйслин (13) Аксиния Савина (1) Альберт Лесной (2) Альбина Снегирь (25) Александра Слюсарчи (6) Александр Лищинский (1) Александр Маврин (2) Александр Петров ( 1) Александр Сергеевич (14) Александра Юн (1) Алена Аганова (1) Алеся Селина (2) Алеся Селина (1) Алекс Комаски (1) Алекс Манчев (1) Алекса Флауэр (2) Александр Денискин (3) Александр Фесс ( 1) Александр Герас imov (3) Александр Гринн (21) Александр Губель (1) Александр Легкий (1) Александр Марголин (4) Александр Мельн (3) Александр Прищепов (1) Александр Семанин (6) Александр Сергеев (4) Александр Скрипников (3) Александр Талюка (2) Александр Заварухин (1) Александр Чуприна (2) Александра Чащина (1) Александра Чувенкова (1) Александра Кох (9) Александра Машковская (1) Александра Ноктюрн (11) Александра Облако (1) Александра Роз (3) Александра Смелова (25) Александра Тамашова (1) Александра Зимны (1) Алексей Анегин (1) Алексей Бурцев (3) Алексей Краузов (1) Алексей Лосев (1) Алексей Малышев (1) Алексей Мартынов (1) Алексей Матвеев (5) Алексей Осипов (5) Алексей Шипуля (1) Алексей Шлычков (3) Алексей Трифонов (2) Алексей Зинин (4) Алия Шакирова (1) Алиса (1) Алиса Карналити (1) Алиса Дерен (1) Алиса Син (2) Алина Бойко (4) Алина Быкова (1) алина гаф (2) Алина Горохова (13) Алина Ильина (1) алина Майер (7) Алина Покорная (2) Алина Поповская (1) Алина Солнечная (2) Алина Васильева (2) Алина Юра Щевич (1) Алина Юрашевич (1) Алиса Арбенина (5) Алиса Бухтоярова (7) Алиса Котельникова (1) Алиса Лисс (2) Алиса Ман (2) Алиса Шторм (1) Алиса Цвет (1) Алиса Вернер (3) Алиша Бренди (4) Алла Бергер (2) Алла Богиня (2) Алла Кобри (1) Алла Колибри (1) Алли Брилсен (1) Аля Котян (3) Алена Аганова (1) Алена Филипповна (6) Алена Герман (1) Алена Гречко (1) Алена Мэй (1) Алена Русанова (1) Алена Сердюкова (3) Звезды-любители (19) Звезды-любители (12) Амелия Бреймут (8) Амина Катинова (1) Ана Чери (11) Ана Диас (4) Анастасия Абрамова (6) Анастасия Алт (1) Анастасия Андреева (1) Анастасия Апполонова (1) Анастасия Беляева (1) Анастасия Брокелин (1) Анастасия Громова (3) Анастасия Хамраева (2) Анастасия Кичатова (1) Анастасия Кичатова (1) Анастасия Кичатова (1) Анастасия Кичатова (1) Анастасия Кичатова (1) Купер (7) Анастасия Лебедева (2) Анастасия Марципанова (18) Анастасия Майер (6) Анастасия Орлова (1) Анастасия Пашкина (6) Анастасия Петрова (1) Анастасия Ренц (4) Анастасия Щеглова (1) Анастасия Селина (2)Шестакова (1) Анастасия Скайлайн (1) Анастасия Снегова (1) Анастасия Сухорукова (9) Анастасия Треплев (5) Анастасия Вегилатес (1) Анастасия Волоцкая (1) Анастасия Евсюкова (1) Анастасия Александрова (1) Анастасия Александрова (1) Анастасия Александрова (1) Квитко (1) Анастасия Никитина (1) Анастейша Гиннес (1) Анастейша Стилл (1) Анастезия Шарли (1) Анатолий Тор (1) Анатолий Тур (3) Андрей Караванов (1) Андрей Левитан (5) Андрей Левитан (1) Андрей Самарцев (1) Андрей Саорфото (3) Андрей Васильев (1) Андрей Войцехов (1) Анджей Франковский (1) Энди Голдлайт (1) Angel Pain (1) Анджель Вивье (2) Ангелина Дорошенкова (7) Ангелина Дороштенкова (1) Ангелина Кузнецова (8) Ангелина Пешкова (5) Ангелина Петрова (6) Ангелина Райская (1) Аника Уайт (3) Анита Сергеева (3) Анна Анна (6) Анна Артеменко (7) Анна Базалевская (2) Анна Боевая (1) Анна Булкина (1) Анна Быканова (2) Анна Делос (2) Анна Добриднева (1) Анна Фараонова (1) Анна Фровола (1) Анна Грейс (2) Анна Грачева (1) Анна Григоренко (2) anna ioannova (9) Anna Kizlik (1) Anna Kolibri (1) Anna Kopotnik (1) Anna Lazereva (1) anna li (9) Анна Маковеева (2) Анна Мари (1) Анна Морозова (1) Анна Мукуца (1) Анна Мускатина (1) Анна Чума (1) Анна Полански (2) Анна Попова (9) Анна Рейс (2) Анна Рашидова (1) Анна Рейс (3) Анна Рвса (1) Анна Сахарова (2) Анна Сазанова (1) Анна Сил (1) Анна Семенович (1) Анна Сын (1) Анна Царалунга (9) Анна Владимирова (10) Антон Демин (1) Антон Макаров (1) Антон Росси (1) Антон Смольский (1) Антония Горячева (1) Аня Дмитриева (1) Аня Орлова (8) Аня Шугар (1) Аня Ветер (1) аня Врублевская (1) Анютка Бережная (1) Анжелика Елишес (2) Анжелика Лазарева (1) Анжелика Лесик (8) Анжелика Маринченко (2) Анжелика Маркиза (1) анжелика милисова (1) Arabstars (1) Argentinastars (15) Арина (2) Арина Бикбулатова (2) аркадий барулин (6) Артем Стисовяк (9) Артемида Ветрокрылая (3) Артур Кукушкин (2) Артур Тимоновский ( 1) Asianstars (17) Аурика Попова (1) Австралийские звезды (13) Austrian S tars (6) Avrora Rubik (1) Axinya Shvyryova (7) Aya Beshen (1) Aygul Ismagilova (1) Balkanstars (1) Barbora Kuzmiakova (1) Bartek Ninoveron (1) Beachstars (31) Beautifulstars (42) Белла Бонд (1) ) BeNeLuxstars (37) BerylQ (2) Bikini Stars (1) Black Cat (2) Black Stars (2) Богдан Поправко (2) Борис Бугаев (1) Борис Сентяев (1) Britishstars (49) Bulgarianstars (2) Камилла Коваль ( 2) Канадские звезды (1) Каролина Крис (4) Звезды знаменитостей (116) Селин Мартен (6) Чира Ковальски (1) Крис Бос (1) Кристина Мэй (1) Кристи Рен (1) Датчанин Кино (1) Звезды комиксов (25) Кавалеры (2) Czechstars (25) Сырой зергут (1) Дан Хечо (4) Дана Гарем (1) Даниэла (3) Дарья Когтева (1) Дарья Козырева (1) Дарья Лофт (1) Дарья Мартвеева (1) Дарья Савишкина (1) ) Дарья Шай (8) Дарья Жетухова (1) Дарина Барби (1) Дарина Литвинова (8) Дарина Никитина (56) Дарина Рыжая Лисица (1) Дарья Снеженко (1) Дарья Александрова (1) Дарья Алексеева (9) Дарья Андреевна (1) ) Дарья Чеканова (2) Дарья Данина (1) Дарья Делишес (1) Дарья Мигунова (1) Дарья Патрина (4) Даша Астафьева (4) Даша Маринина (10) Даша Михайлова (5) Даша Снежная (3) Давид Дубницкий (6) Делия А (2) Денис Фустаченко (7) Денис Гончаров (2) Денис Солодов (1) Дева Огненая (1) Диана Агеева (4) Диана Дульче (3) Диана Нарбикова (1) Диана Седова (5) Диана Ушакова (2) Дигма Игнатов (1) Дима Куликов (1) Дима Минакин (1) Димитрий Чапала (1) disha shemetova (36) DJ Pragmatica (3) Djanestars (1) Дмитрий Бегма (1) Дмитрий Борисов (2) Дмитрий Чернов (1) Дмитрий Елизаров (3) Дмитрий Куликов (1) Дмитрий Плотников (4) Дмитрий Разин ( 7) Дмитрий Вячеславович (4) Джулия Сунцова (2) Джульетта Волк (1) Эд Хинин (1) Екатерина Алябова (1) Екатерина Бекиш (4) Екатерина Енокаева (18) Екатерина Клигер (12) Екатерина Колосова (2) Екатерина Костенко ( 1) Екатерина Котенова (7) Екатерина Любимова (2) Екатерина Мальцева (3) Екатерина Новикова (2) Екатерина Семененя (1) Екатерина Стульпинская (1) Екатерина Воликова (1) Екатерина Яковенко (1) Екатерина Злобина (1) Екатерина Зуева (7) Елена Ищенко (1) Елена Иванова (1) Елена Курагина (4) Елена Миледи (1) Елена Панова (1) Елена Перминова (1) Елена Рязанова (1) Елена Самсонова (9) Елена Слабко (2) Элеонора Спиренкова (2) Элина Дзе (1) Элина Любовь (3) Элина Сергеева (1) Елизавета Барышева (1) Елизавета Демченко (1) Елизавета Шабурова (1) Елизавета Соколова (1) Елизавета Тимакова (1) Елизавета Вайсс (4) Елизавета Задорожная (5) Элла Голубева (1) Элли Шици (2) Элли Лин (1) Эллина Мюллер (11) Элли Шизззи (2) Эльмира Эльча (1) Эмилия Сухинина (1) Эмили Блум (10) Эмили Райз (3) Эмма наталья герих (5) Энже Сайфуллина (1) Эрик Бурханаев (1) Эта Девушка (3) Эта Девушка (1) евгения диордийчук (22) Ева Алмова (6) Ева Чехова (1) Ева Эльфи (18) Ева Фаррухххамра (1) Ева Кари (1) Ева Луничкина (6) Ева Мария (9) Ева Моди (3) Ева Щербань (1) Ева Тали (4) Эвелин Кью (2) Евгения Гранде (3) Евгения Пономарева (3) Евгения Таланина (2) Евгения Волк (4) Евгения Мосиенко (1) Евгений Ангелов (1) Евгений Балин (1) Евгений Иванович (2) Евгений Лоза (2) Евгений Нефёдов (1) Евгений Никонов (2) Exoticstars (1) Fabio Roman (2) Faith (1) Fatinia Ditya (1) Популярные (368) Fenix ​​Raya (2) fia Meos (15) Филипе Коррейя (1) Филиппо Сано (1) Филипо Сано (1) Frenchstars (23) Галилея Калинка (1) Галина Федорова (5) Галина Павличенко (7) Галина Жижикина (1) Галя Котова (2) Галюша Дубененко (1) Гаяне Багдакапян (1) Джин Орикс (6) Георг Казанцев (1) Джордж Майер (1) Георгий Чернядьев (1) Germanstars (53) Глория Сол (28) Greecestars (22) Грета Эльгрина (1) Хайди Ром ( 1) Хайди Романова (7) Хелена Винновилл (1) Хельга Лавекати (6) Иродиада Чат-Нуар (3) Хинди Ева (1) Hungarystars (24) Игорь Джентили (1) Игорь Кирьянов (15) Игорь Ковальчук (1) Игорь Куприянов (1) Игорь Маковский (1) Игорь Рыбка (2) Игорь Щухин (1) Игорь Шевчук (2) Игорь Воробей (2) Игорь Воронцов (2) Игорь Вюшкин (2) Илья Пистолетов (1) Ильвы Кокомо (4) Илья Головин (1) Илья Грек (1) Илья Пистолетов (2) Индиана A (3) Инесса Тушканова (1) Инга Лис (3) Инна Долматова (1) Инна Попенко (2) Инна Тихонова (4) Иннес Айласова (1) Иннушка Владимирская (5) Иннуска Владимирская (1) Ира Кошман (3) Ирен Пионтковская (1) Ирина Артемьева (1) Ирина Бессонова (3) Ирина Бондаренко (1) Ирина Дрейт (1) Ирина Губева (2) Ирина Лозовая (1) Ирина Парамонова (1) Ирина Шагян (3) Ирина Теличева (7) Ирина Ульянова (1) Ирина Бондаренко (1) Ирина Быкова (1) Ирина Иванова (2) Ирина Ольховская (1) Итальянские звезды (50) Ива Алила (1) Иван Лебедев (7) Ivy Poison (6) Яна Бубу (1) Jasmine Jazz (2) Jenny May (1) Jenny Q (1) Джессика Альбанка (5) Джиа Лисса (1) Джослин Кео (2) Джулия Абрамс (12) Юлия Дамиа (2) Юлия Диметра (1) Юлия Кизим (2) Юлия Коврова (4) Юлия Мельникова (2) Юлия Реутова (1) Юлия Романова (1) Юлия Стар (9) Каан Алтындал (1) Калин Костов (1) Калинка Финк (1) Камилла Латоян (1) Карина Андреева (1) Карина Авакян (18) Карина Карделян (1) Карина Клименкова (1) Карина Митай (1) Катажина Жешовская (4) Кейт Хромия (4) Кейт Рич (1) Ка терина Дьяконова (6) Катерина Клейн (3) Катерина Прист (1) Катерина Райх (24) Катерина Рубинович (7) Катерина Шахраманянц (1) Катерина Ширяева (11) Катерина Зайцева (1) Катерина Марченко (1) Катерина Тютюнник Катя Мартин (5) Катрин Новикова (2) Катя Белых (1) Катя Кловер (22) Катя Котаро (3) Катя Осипова (1) Кира Дихтярь (1) Кира Савенец (2) Кирилл Чернявский (1) Кирилл Васильев (6) Кит Рыша (2) Китриша Китриша (1) Константин Макарчиков (1) Константин Михалев (1) Крис Тодо (1) Кристин Касс (2) Кристина Баулина (2) Кристина Чадык (1) Кристина Федорова (5) Кристина Финк (3) Кристина Иванова (2) Кристина Казакова (2) Кристина Князева (1) Кристина Крестовски (1) Кристина Макарова (29) Кристина Мужжухина (1) Кристина Щербинина (12) Кристина Тишова (5) Кристина Якимова (4) Кристина Яркая (1) Кристина Жук (1) Ксения Брыкина (1) Ксения Лазарева (6) Ксения Микулина (1) Ксения Милютина (1) Ксения Немая (2) Ксения Салабаева (1) Ксения Савостьянчик (1) ) ксения вегнер (4) Ксения Янковская (1) Ксюша Кос (1) Ксю Александровна (1) Ксю Говорухина (1) ксюша Черная (1) ксюша Егорова (6) Ксюша Клеопова (1) Ксюша Пакселева (2) Кова ) Ксюша Тялаш (1) Кунгурцев Вячеслав (1) Лада Брик (19) Лада Кравченко (1) Лана Хвост (1) Лара К (3) Latinostars (31) Лаура Девушкат (1) Лаура Соерс (1) Лайла Балан (1) Леф Ефимов (1) Лелька Сердюкова (4) Лена Лим (2) Лена Петрова (1) Лера Балери (1) Лера Коваленко (5) Лера Захарова (2) Леся Сито (2) Лева Шаршукова (2) Лея Урба (1) Лия Каграманова (4) Лия Ситдикова (1) Лидия Павлова (1) Лидия Саводерова (9) Лика Одинокая (1) Лика Скай (1) Лила Майти (1) Лилия Кот (1) Лилит Вебер (4) Лилия Хромова (2) Lily Sands (3) lina mercury (5) Lingerie Stars (2) Lisa Buttors (1) Little Edem (1) Любовь Калиш (1) Лия Майти (1) Лиза Свистунова (4) Лора Палмер (4) lu lu (3) Люси Ардженто (1) Люсия Яворчекова (4) Луиза Черная (5) Луковица (1) Лидия Пономарева (2) Любовь Красовск aya (1) Мадс Менсис (5) Максим Густарев (1) Мара Брутал (2) Марат Сафин (5) Мареева (2) Маргарета Мирошник (4) Маргарита Алексеева (3) Маргарита Гаевская (2) Маргарита Релина (1) margo amp (12) Марго Дюма (9) Марго Рокоссовская (3) Мария Александрова (1) Мария Автахова (1) Мария Дезидерева (22) Мария Дёмина (12) Мария Евдокимова (1) Мария Филатова (8) Мария Голомуздова (1) Мария Клепченко (1) Мария Кощечкина (2) Мария Кошечкина (1) Мария Лапулина (5) Мария Лиман (1) Мария Мальцева (4) Мария Минаева (7) Мария Попова (3) Мария Резникова (3) Мария Рябушкина (11) Мария Сизова (2) Мария Турова (1) Мария Тутова (2) Мария Вишневская (3) Мария Зайцева (1) Марианна Красноус (6) Марианна Маркина (5) Марианна Меркулова (3) Марина Гурская (1) Марина Лопатина (2) Марина Маринкина (4) Марина Нельсон (1) Марина Новые (1) Марина Польнова (10) Марина Тыщук (3) Марипоса (4) Марисабель Модель (3) Мария каста (1) Марта Громова (22) Мартин Нидербергер (5) Мартин Виланд ( 1) Маруся Климова (1) Мэри Белл (3) Мэри Калисы (1) Мэри Q (1) Мэри Рок (5) Марьям Марсова (1) Маша Амен (1) Маша Емец (1) Матильда Швейн (1) Матильда Грозовое Крыло (30) Макс Антонов (1) Макс Лук (3) Максим Чуприн (4) Максим Паркер (3) Максим Шестаков (8) Майя Дмитриева (5) Майя Кармен (1) Мелисса Ру (1) Menstars (2) mexicanstars (7) Mia Frost (5) ) Михаэла Фихтнерова (1) Михал Янски (1) Мишель Ильмик (13) Майк Дарзи (11) Майк Даунсон (3) Михаил Некрасов (1) Михаил Решетников (1) Михаил Шестаков (5) Михаил Смирнов (1) Михаил Тарасов (1) ) Михалыч Мишин (1) Микки Сон (1) Мила Азул (6) Мила Рэй (2) Мила Смирнова (3) Мила Строгая (3) Милана Мускат (9) Милена Ангел (3) Милена Кравцева (1) Мира Ильина (3) ) Мистер Манкерманн (1) Митя Сидор (1) Модель Алиса (9) Моника Фокс (1) Мори Пусечка (2) Мурбо Даглдиян (3) Модель Наатроша (1) Надежда Чечинская (4) Надежда Германова (1) Надежда Хаустова (1) ) Надежда Пономаренко (1) Надежда Ремар (1) Надежда Свитальская (1) Надя Косенко (1) Надя Наба kova (1) Надя Русу (5) Надя Шеллер (1) Нана Шуэт (1) Нэнси Эйс (1) Настасья Федорова (1) Настик Китсан (1) Настя Б (1) Настя Бейлис (4) Настя Белова (3) Настя Гарнис (2) Настя Глинцева (3) Настя Гунн (1) Настя Комарова (6) Настя Польна (1) Настя Вечканова (1) Настя Злобич (2) Настюха Сафарова (1) Ната Ли (1) Натали Антонова (6) натали Вишня (7) Наталья Андреева (24) Наталья Маркелова (2) Наталья Овчинникова (2) Наталья Рэндл (1) Наталья Соколова (1) Наталья Зинченко (1) Наталья Гончарова (1) Наталья Красавина (10) Наталья Макарук (5) Наталья Немчинова (1) Наталья Перова (1) Наталья Петрова (1) Наталья Сафронова (4) Наталья Удовенко (7) Наталья Успакова (1) Наталья Зайцева (2) Наталья Значенко (2) Наташа Коротовских (1) Наташа Кузнецова (1) Маркелова (1) Наташа Тихомирова (16) Ная Мамедова (10) Нелли Латфулина (1) Нео Нуар (3) Ной Линг (1) Николас Спектр (1) Николь Брук (1) Николь Винтер (1) Николь Янг (15) Никзрикпик (1) Ниемира (7) night Shade (1) Ниго (1) Ника Бурчик (1) Ника Гаевская (3) Ника Мельн (3) Ника Нигоника (1) Ника Рождественская (1) Никки (3) Никол Бейлик (2) Никол Миллер (24) Никол Швец (2) Николай Конарев (1) Николай Николаев (1) Николай Пиросманишвили (1) Нюра Кошкина (1) Нюра Бакарасова (1) north en (1) Octokuro (3) Оксана (1) оксана баст (7) Оксана Бойкова (1) ) Оксана Чуча (14) Оксана Громова (2) Оксана Лайкова (2) Оксана Липинская (1) Оксана Золотарева (1) Олег Борзунов (2) Олег Косырев (2) Олег Коваленко (1) Олег Сидоренко (2) Елена Доронина (8) ) олеся бухтоярова (6) Олеся Каргина (1) Олеся Хомут (1) олеся Левина (5) Олеся Маяцкая (1) Ольга Абрамович (1) ольга альберти (10) Ольга де Мар (2) ольга Горлачук (3) ольга иванова ( 1) Ольга Каминская (2) Ольга Капытина (2) Ольга Кобзарь (85) Ольга Куприянова (1) Ольга Курбатова (1) Ольга Малышева (1) Ольга Мухиднова (18) Ольга Огнева (1) Ольга Овсиенко (1) Ольга Ром ( 2) Ольга Рудик (4) Ольга Савельева (3) Ольга Шестакова (2) Ольга Сидоренко (1) Ольга Терешкина (1) ольга Вейде (4) Ольга Андрющенко (1) Оля Абрамович (1) Оля Фей (1) Оля Лелай (1) Оля Мирьянова (1) Оля Сибилёва (1) OnlyFans Stars (8) Open Pussy Stars (1) Орнелла Игошина (3) Оксана Громова (5) Оксана Вознюк (1) Паоло Лаццаротти (2) Partystars (5) Паша Ващенко (12) Паша Ващенко (2) Павел Рипке (1) Павел Киселев (1) Павел Проценко (1) Павел Троицкий (4) Пелагея Клевцова (2) Пелле Ларссон (1) Петр Черныш (1) petr che (8) petr demichev (3) Philippe Claes (3) Philippe Iniguez (3) Phillipe Claes (7) Фотограф (770) Piotr Caslet (1) Пайпер (1) Полина Азарова (3) Полина Д (1) Полина Гуляева (3) Полина Кадынская (3) Полина Князева (5) Полина Малиновская (1) Полина Мануленко (1) Полина Шунайлова (2) Полина Ситнова ( 2) Полина Царева (3) Polishstars (18) Popy Moore (3) Portugalstars (2) Prosto Lich (3) Public Stars (1) Queen Mary (2) Rada Romanova (2) Renata Lusin (1) Rocco Cruz (1) Родислав Дрибен (2) Роман Филиппов (9) Romanianstars (6) Роня Чоцки ( 1) Роза Ройс (2) Руслан Ашракаев (1) Руслан Лобанов (1) Руслан Шпаков (2) Руслан Якубов (2) Руслана Шеффер (1) Russianstars (14) Сабина Джусикайте (1) Сабрисс (1) Саша Лейендекер (9) Саде Маре (2) сказал антидепрессант (4) Салина Дебуа (1) Сальвадор Кейдж (1) Сэм Никс (1) Сандра Ариана (5) Sandra Wellness (6) Сара Капустина (1) Саша Бабаев (1) Саша Воробей (2) Саша Захватова (10) Сашенька Хулинганка (1) Сата Джонс (1) Селена Вернер (5) Селфиестры (24) Сера Джой (4) Серена Мамасита (1) Сергей Тазик (5) Сергей Басович (1) Сергей Чмыхов (1) Сергей Дизель (1) Сергей Фрейер (1) Сергей Иванов (3) Сергей Ковбасюк (2) Сергей Ларинов (1) Сергей Ленин (11) Сергей Макшун (6) Сергей Минин (1) Сергей Остаповский (1) Сергей Рейдер (1) Сергей Савельев (1) Сергей Старостин (1) Сергей Тимощук (1) Сергей Ушаков (1) Сергей Яшиков (1) Шура Петере (4) Саймон Болз (18) Симпсоны (7) Скандинавские звезды (5) Слава Кошка (6) Словацкие звезды (6) ) Снежанна Максимова (1) Софи Ка (3) Софья Ковалёва (1) Соф ia Наливайко (2) София Сарочинская (1) Софья Морская (5) Сола Зола (1) Соня Шехтман (1) Сонни Сан (1) Sovmur Hard (4) Spanishstars (9) Special (205) Sport Stars (2) Sportstars ( 2) Спайро Зарифопулос (1) Стакис Лаус (3) Станислав Дашин (1) Станислав Воробьев (2) StarlaQ (2) Стас Пушкарев (1) Стас Шмель (3) Стася Шпиц (15) Стефан Грожан (1) Стефан Соелл (3) ) Стефани Ковалёва (1) Стефания Йодковская (9) Стефания Круз (1) Степан Хайнзл (1) Стивен Джордан (3) Студия 66 (1) Сюзанна А (1) Света Волощук (2) Света Волостчук (1) Светлана Гембар (49) ) Светлана Гончаренко (1) Светлана Иванова (7) Светлана Клер (8) Светлана Копнина (1) Светлана Никончук (2) Светлана Никонова (1) Светлана Ряхских (1) Светлана Синицына (3) Светлана Виноградова (5) ) Светлана Чумаченко (1) Сибил А (1) Сибил Кайлена (1) Тамила Левитан (2) Таня Банникова (1) Таня Федосеева (10) Таня Фрост (4) Таня Глазур (3) Таня Касумян (2) Таша Новак (1) ) Татьяна Комбарова (1) Татьяна Котова (2) Татьяна Бахтина (1) Татьяна Боброва (1) Татьяна Карпова (1) Татьяна Комбарова (2) Татьяна Кораблина (1) Татьяна Путятина (2) Татьяна Сизова (1) Татьяна Викернес (4) Тая Вайс (5) Терри Ричардсон (3) Томас Агац (2) Томас Саймон (2) Тиана Глосс (2) Тики Бит (1) Тим Левицки (14) Тина Суронова (1) Тиса Райт (4) Томас Юнгвирт (1) Turkishstars (88) Ульяна Ашурко (5) Underboobsstars (1) ура печень (1) Звезды США (119) Валентина Карабанова (2) Валерия Еселенок (3) Валерия Солдатова (1) Валерия Якисель (6) Ванда Мей (1) Василиса Александровна (1) Василий Вермут (1) Василий Голубкин (1) Вавилия Кристофф (1) Вера Длуговлоса (1) Вера Калинкина (1) Вероника Евдокимова (6) Вероника Карпова (1) Вероника Климовиц (1) Вероника Кохан (1) Вета Переседова (2) Ви Шы (5) Виктор Воробьев (1) Виктория Игл (1) Виктория Иванова (1) Виктория Кл (4) Виктория Рейн (9) Виктория Соколова (16) видео (122) Вики Болотова (1) Виктор Корнеев (2) Виктор Стингер ( 5) Виктор Сваровский (2) Виктор В оробьев (4) Виктория Андреевна (1) Виктория Гамаюн (1) Виктория Ильченко (1) Виктория Каминская (1) Виктория Колодько (3) Виктория Одинцова (2) Виктория Шелаховская (1) Виктория Волконская (1) Виктория Яровая (1) Виктория Яровая Алико (6) Виолетта Грехова (1) Вита Гончарук (3) Виталий Кононов (5) Виталий Вахрушев (1) Влада Вотрина (3) Владимир Гайдамакин (3) Владимир Хотенко (3) Владимир Лестровой (2) Владимир Набоков (1) Владимир Николаев (2) Владимир Онегин (1) Владимир Серков (1) Владимир Стефанович (4) Владислав Гарбузов (1) Владислав Кошелев (2) Всехорошо (1) Вячеслав Кунгурцев (2) Вячеслав Воробьев (1) Веб-камера (612) Вера Иванищин ( 1) ян Маклайн (7) Яна (1) яна арбенина (5) Яна Бубу (1) Яна Франк (2) Яна Пальчевская (3) Яна Шейн (1) Яна Сильф (1) Яна Смирнова (2) Яна Свешникова (1) ) Яна Владимирова (1) Яна Вест (3) Ева Ганту (1) Евгения Печланер (3) Youtubestars / Social Mediastars (58) Юлия Бондарева (1) Юлия Бричковская (1) юлия федорова (1) Юлия Логачева (18) Юлия Никифорова (3) Юлия Николаева (2) Юлия Пилушка (1) Юлия Риттер (4) Юлия Силенкова (4) Юлия Скалозуб (1) Юлия Сучкова (1) Юлия Титова (2) Юлия Ярошенко (8) Юлия Зубова (25) Юлиана Кузьмина (4) Юлианна Карамисева (1) Юля Белова (1) Юля Дмитриева (5) Юля Мильштейн (3) Юня Андреевна (1) Юния Андреевна (1) Юра Семенов (1) Юрий Богомаз (1) Юрий Давыдов (4) Зачар Восход (7) Зайка Озорная (1) Жанна Эстафьева (1) Жанна Евстафьева (1) Жанна Павлова (13) Жанна Силина (1) Женя Белая (11) Женя Стопа (11) ikol Μillep (1)

Дефицит витамина B12 в пище ухудшает моторную функцию и изменяет выживаемость нейронов и метаболизм холина после ишемического инсульта в сенсомоторной коре у самцов и самок мышей среднего возраста

Резюме

Большинство населения стареет, в 2000 году 10% общая численность населения мира составляла более 60 лет, и, по прогнозам, к 2050 году эта доля увеличится до 21%.В настоящее время ишемический инсульт поражает преимущественно людей пожилого возраста. Питание является изменяемым фактором риска инсульта, поскольку с возрастом способность людей усваивать некоторые питательные вещества снижается. Основным примером является витамин B12, большинство пожилых людей испытывают дефицит витамина B12 из-за изменений в расщеплении и абсорбции витамина, которые происходят в процессе старения. Используя модельную систему мышей, мы исследовали роль дефицита витамина B12 в исходе ишемического инсульта и исследовали механистические изменения в ишемической по сравнению с неишемической тканью мозга.В возрасте 10 недель самцов и самок мышей C57Bl / 6J переводили на контрольную диету или диету с дефицитом витамина B12 в течение 4 недель до ишемического повреждения. В возрасте 14 недель мы индуцировали ишемический инсульт в сенсомоторной коре с использованием модели фототромбоза. После повреждения животные продолжали питаться в течение 4 недель. В возрасте 18 недель мы оценили исход инсульта с помощью ускоряющего вращающегося стержня и задач по установке передней лапы. После сбора поведенческих данных мы усыпили животных и собрали ткани мозга, крови и печени для оценки гистологических и биохимических измерений.У всех животных, которых содержали на диете с дефицитом витамина B12, были повышенные уровни общего гомоцистеина в плазме и ткани печени. Самцы и самки мышей, которых содержали на диете с дефицитом витамина B12, имели нарушения баланса и координации на ускоряющем вращающемся стержне по сравнению с животными контрольной диеты после ишемического инсульта. В ишемизированной мозговой ткани разницы между группами по объему поражения не наблюдалось. В ишемической мозговой ткани группы с дефицитом витамина B12 было больше выживаемости нейронов по сравнению с контрольной группой.Изменения метаболитов холина в ишемизированной мозговой ткани произошли в результате диеты и секса. В заключение, данные, представленные в этом исследовании, подтверждают, что дефицит витамина B12 влияет на двигательную функцию у пожилых взрослых самцов и самок мышей после ишемического инсульта. Механизмы, управляющие этим изменением, могут быть результатом выживания нейронов и компенсации метаболизма холина в поврежденной ткани мозга.

Заявление о конкурирующем интересе

Авторы заявили об отсутствии конкурирующего интереса.

Определенный профиль N6-метиладенозина (m6A), предоставляемый METTL3, регулирует переходы состояния мышечных стволовых клеток / миобластов

Мыши и уход за животными

Все мыши содержались в соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных, и все процедуры были одобрено Комитетом по уходу и использованию животных Корнельского университета. Для экспериментов по повреждению скелетных мышц ранее опубликованные мыши B6.Cg-Pax7 ^{tm1 (Cre / ERT2) Gaka} / J ³³ (JAX: 017763) были скрещены с B6N.129S6-Gt (ROSA) 26Sor ^{tm1 (CAG-tdTomato *, — EGFP) / Ees} / J мышей ³⁴ (JAX: 005304) для производства следующей мыши: Pax7 ^CreERT2 ; Rosa26 ^nTnG (далее именуемые как Pax7 ^нТнГ ). Мышей Pax7 ^nTnG использовали во всех экспериментах по повреждению мышц. Мышей, повсеместно экспрессирующих люциферазу, FVB-TG (CAG-luc, -GFP) L2G85Chco / J (JAX: 008450, мыши CMV- luc ) ^35,36 , использовали для выделения донорских клеток для экспериментов по трансплантации и их использовали. трансплантировали мышам NSG с иммунодефицитом (NOD.Cg-Prkdc ^scid Il2rg ^tm1Wjl / SzJ, JAX: 005557) ^37,38 . Животных случайным образом распределяли по группам лечения, и группа обработки образцов, полученных от каждого животного, была скрыта от исследователя, выполняющего последующий анализ. Количество животных в экспериментальных условиях указано в подписях к рисункам, а размеры выборки основаны на принятых в полевых условиях.

Повреждение скелетных мышц

Чтобы вызвать повреждение скелетных мышц, 50 мкл 1,2% BaCl ₂ (Sigma, St.Louis, MO, USA) инъецировали в переднюю большеберцовую мышцу (TA) мышей Pax7 ^nTnG под изофлурановой анестезией. Мышей умерщвляли при 0 (исходный уровень), 1, 3, 5 и 10 dpi, мышцу ТА мгновенно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C до выделения мРНК.

Культура миобластов C2C12

миобластов C2C12 (ATCC, Манассас, Вирджиния, США) культивировали в питательной среде, содержащей среду Игла, модифицированную по Дульбекко с высоким содержанием глюкозы (DMEM, Gibco, Gaithers, MD, США), с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки, 4 мМ глутамакс (Gibco, Gaithers MD, США) и 1% пенициллин-стрептомицин (Corning, Питтстон, Пенсильвания, США).Культуры не тестировались на контаминацию микоплазмами. Когда культуры были в пределах 80-100% конфлюэнтности, их переводили на среду, содержащую DMEM с высоким содержанием глюкозы, дополненную 2% инактивированной нагреванием лошадиной сывороткой, чтобы способствовать дифференцировке. Образцы GM были взяты через 24 часа культивирования в среде для выращивания, когда культуры были конфлюэнтными на ~ 50%, а образцы DM были взяты в различные дни после перехода на среду для дифференцировки, как указано. Все миобласты C2C12 использовали между 5 и 10 пассажами и культивировали в атмосфере 5% CO ₂ при 37 ° C на планшетах, покрытых коллагеном (тип I, Rat Tail, Corning, Pittston, PA, USA).Согласно принятым в данной области правилам, все эксперименты повторяли не менее трех раз для всех экспериментов с культурами клеток (за исключением экспериментов с MeRIP-seq) с конкретными значениями, указанными в подписях к рисункам.

Первичная культура миобластов мыши

Использовали первичные миобласты мыши пассажей 17–20, полученные, как описано ранее. ³⁹ . Первичные миобласты мышей культивировали в среде роста, состоящей из 43% среды DMEM с низким содержанием глюкозы (Gibco, Gaithers, MD, США), 40% Ham’s F10 (Gibco, Gaithers, MD, США), 15% фетальной бычьей сыворотки, 1% пенициллин-стрептомицин, 1 % Глутамакс и 2.5 нг / мл основного фактора роста фибробластов (Promega, Мэдисон, Висконсин, США). Когда конфлюэнтность культур составляла от 80 до 100%, их переводили на среду, содержащую 2% инактивированной нагреванием лошадиной сыворотки. Подобно экспериментам с миобластами C2C12, образцы GM были получены при ~ 50% конфлюэнтности (24 ч после посева), а образцы DM были получены в различные дни после перехода на среду для дифференцировки. Первичные миобласты мыши высевали на планшеты, покрытые коллагеном (тип I, крысиный хвост), и выдерживали в атмосфере 5% CO ₂ при 37 ° C.

m

⁶ A LC-MS

Для анализа уровней m ⁶ A в ткани скелетных мышц РНК выделяли с использованием реагента Trizol (Ambion, Austin, TX, USA) в соответствии с инструкциями производителя. Для анализа уровней m ⁶ A в клеточных лизатах и ​​РНК, выделенной из ткани скелетных мышц, мРНК выделяли с помощью Dynabeads Oligo (dT) ₂₅ (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) в соответствии с рекомендациями производителя. Протокол подготовки образцов и метод ЖХ – МС был адаптирован из ранее опубликованного протокола ⁴⁰ .Сто нанограмм мРНК инкубировали с 2 единицами нуклеазы P1 (Sigma, Сент-Луис, Миссури, США) в буфере из DEPC, обработанного 25 мМ NaCl и 2,5 мМ ZnCl ₂ при 37 ° C в течение 60 мин для выделения индивидуальных нуклеотидов. с последующей инкубацией в течение 60 минут при 37 ° C с 0,5 ед. щелочной фосфатазы (Roche, Базель, Швейцария) для удаления всех фосфатных групп с образованием нуклеозидов. Затем образцы разбавляли до 200 мкл Di H ₂ О. Аденозин (Sigma, Сент-Луис, Миссури, США) и стандартные кривые m ⁶ A (Toronto Research Chemicals, Северный Йорк, Канада) также получали серийными методами. разбавление в Di H ₂ O.Перед вводом в систему ЖХ / МС / МС, оборудованную автосамплером и насосом Accela (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) и TSQ Quantum Access (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), образцы и точки калибровки были смешаны. с равным объемом раствора, содержащего 10 мкМ ¹³ C ₅ -уридин (Toronto Research Chemicals, North York, Canada) в 0,1% муравьиной кислоте в Di H ₂ O в качестве внутреннего стандарта. Десять микролитров образца вводили в колонку Phenomenex Luna C18 (250 мм × 4.6 мм, 5 мкм, Phenomenex, Торранс, Калифорния, США). Градиент элюирования 0,1% муравьиной кислоты в Di H ₂ O и 0,1% муравьиной кислоты в метаноле при 0,45 мл / мин проводили следующим образом: 0 мин, 10% метанол; 5 мин, 99% метанол; 7 мин, 99% метанол; 8 мин, 10% метанол; 12 мин, 10% метанол. Программное обеспечение XCalibur (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) использовали для количественного определения m ⁶ A и аденозина. Переходы множественного мониторинга реакции (MRM) в положительном режиме были: m / z 282–150 для m ⁶ A и m / z 268–136 для аденозина.Было рассчитано отношение площадей пика m ⁶ A к общему аденозину (m ⁶ A + общий аденозин) и представлены различия в соотношениях.

MeRIP-секвенирование

РНК для MeRIP-seq была выделена из миобластов C2C12 с использованием Omega E.Z.N.A. ^® Total RNA Kit I (Omega Bio-Tek Inc, Норкросс, Джорджия, США). Качество РНК определяли электрофорезом в денатурирующем агарозном геле. мРНК выделяли из> 120 мкг общей РНК с использованием набора для выделения поли (A) мРНК Arraystar Seq-Star ^TM (ArrayStar Inc, Роквилл, Мэриленд, США) в соответствии с инструкциями производителя.Выделенную мРНК фрагментировали до среднего размера 10 нт в 20 мкл буфера, содержащего 10 мМ Zn ²⁺ и 10 мМ трис-HCl (pH 7,0) в течение 7 мин при 94 ° C. Размер фрагмента подтверждали электрофорезом в агарозном геле. Десять процентов фрагментированной мРНК были сохранены для секвенирования РНК, чтобы служить в качестве входного контроля для MeRIP-seq. Оставшуюся фрагментированную мРНК использовали для иммунопреципитации m ⁶ A.

m ⁶ Иммунопреципитация была выполнена путем объединения фрагментированной мРНК с 2 мкг антитела анти-m ⁶ A (каталожный номер 202003, Synaptic Systems, Геттинген, Германия) и вращения головы за хвостом в течение 120 мин при 4 ° C. в общем объеме 500 мкл.Двадцать микролитров овечьего антикроличьего IgG Dynabeads ^TM M-280 (клон 11204D, Thermo Fisher Scientific Waltham, MA, USA) блокировали 0,5 мг / мл бычьего сывороточного альбумина при 4 ° C в течение 120 мин. Блокированные Dynabeads и смесь фрагментированных мРНК / антител объединяли в течение 120 мин при 4 ° C. Затем раствор промывали 3 раза буфером 10 мМ трис-HCl (pH 7,4), 150 мМ NaCl и 0,1% NP-40 с последующими 2 раза промывками буфером, содержащим 10 мМ трис-HCl (pH 7,4). , 50 мМ NaCl и 0,1% НП-40.мРНК, иммунопреципитированная на Dynabeads ^TM , была разделена путем инкубации с 200 мкл элюирующего буфера [10 мМ Tris HCl (pH 7,4), 1 мМ EDTA, 0,05% SDS, 40 ед. протеиназы K (Qiagen, Hilden, Германия)] в течение 30 дней. мин при 50 ° C. Затем мРНК экстрагировали фенол-хлороформом и осаждали этанолом перед секвенированием.

Набор KAPA Stranded mRNA-seq Kit (Illumina, San Diego, CA, USA) использовали для получения библиотек RNA-seq для m ⁶ A иммунопреципитированной мРНК и входных контрольных библиотек мРНК.Качество библиотек определяли с помощью биоанализатора Agilent 2100. Набор HiSeq 3000/4000 PE Cluster Kit (Illumina, San Diego, CA, USA) использовали для создания кластеров из подготовленных библиотек в соответствии с инструкциями производителя. Кластерные библиотеки секвенировали в системе Illumina HiSeq 4000.

Анализ секвенирования MeRIP

Считывания, обрезанные с помощью 5 ‘, 3’-адаптера, выравнивали с эталонным геномом mm10 с использованием HISAT2 (v2.1.0) ⁴¹ . ExomePeak использовался для вызова пика MeRIP, и статистически значимые области, обогащенные MeRIP (пики MeRIP), были идентифицированы на уровне образца с порогом значимости P ≤ 0.05 ⁴² . ExomePeak также использовали для сравнения транскриптов, которые были дифференциально m ⁶ A-модифицированы между образцами GM и 3d DM со значимостью, установленной на P ≤ 0,05 ⁴² .

Анализ секвенирования РНК

Результаты входного контроля РНК-секвенирования были подвергнуты анализу дифференциальной экспрессии генов с использованием edgeR ⁴³ в RStudio (версия 3.6.1). Гены с минимум двумя числами на миллион по крайней мере в трех образцах были оставлены для анализа.

Анализ пути

Анализ пути проводился с использованием теста на перепредставление молекулярных функций GO-Slim GO-Slim (версия 14.1) с поправкой на частоту ложного обнаружения (FDR) ¹⁶ . Анализ PANTHER проводили с использованием списков m ⁶ A-модифицированных транскриптов, которые были обогащены ( P <0,05) GM, и отдельно списков транскриптов, которые были обогащены 3d DM на основе набора данных MeRIP-seq. Анализ PANTHER был также выполнен с использованием списка транскриптов, которые по-разному регулируются между GM и 3d DM в соответствии с данными RNA-seq (FDR <0.05, логарифм кратного изменения> 1,5 или <-1,5).

Трансфекция миобластов C2C12 siRNA

Миобласты C2C12 были обратно трансфицированы комплексами siRNA-липид (RNAiMAX, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), нацеленные на Mettl3 (siMettl3, Cat: 4457298, США) или ненаправленный контроль (siCON, Cat: 4390846, Ambion, Austin, TX, USA). Миобласты C2C12 поддерживали в питательной среде в течение 48 часов после трансфекции до анализа экспрессии генов, экспрессии белка и общих уровней m ⁶ A.

Количественная RT-PCR

Набор Applied Biosystems High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) был использован для синтеза кДНК посредством обратной транскрипции 2 мкг РНК, экстрагированной с использованием Omega E.Z.N.A. ^® Total RNA Kit I (Omega Bio-Tek Inc, Norcross, GA, USA) в соответствии с инструкциями производителя. Качество и количество РНК определяли спектрофотометрически. Количественную ОТ-ПЦР (кПЦР) использовали для измерения уровней мРНК Mettl3 (Mm01316319), Pax7 (Mm0135484), Myod1 (Mm00440387) и Myog (Mm00446195).Уровни экспрессии нормализовали до экспрессии 18S (Mm03928990) с использованием системы экспрессии генов Taqman (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA).

Иммуноблоттинг

Лизаты клеток собирали с использованием буфера RIPA, содержащего ингибиторы протеазы (cOmplete, Roche, Базель, Швейцария) и фосфатазы (PhosSTOP, Roche, Базель, Швейцария). После лизиса клеток белковая фракция очищалась от других клеточных остатков центрифугированием (12000 × g, , 15 мин, 4 ° C).Десять микрограммов белка, как определено анализом бицинхониновой кислоты (Thermo Fisher Scientific Waltham, MA, USA), загружали в 10% гели SDS и переносили на мембраны из PVDF. Мембраны блокировали хемилюминесцентным блокирующим буфером (bl∅k ^TM -CH, MilliporeSigma, Берлингтон, Массачусетс, США) в течение 60 минут при комнатной температуре (RT) перед переносом в раствор, содержащий либо первичное антитело METTL3 (1: 1000 разведение в хемилюминесцентном блокирующем буфере, инкубация в течение ночи при 4 ° C, Cat: 15073-1-AP, Proteintech Group Inc, Rosemont, IL, USA) или первичное антитело-TUBULIN, конъюгированное с HRP (разведение 1: 1000 при хемилюминесцентном блокировании. буфер, 60 мин инкубации при комнатной температуре, Cat: 9099, Cell Signaling, Данверс, Массачусетс, США).Мембраны, инкубированные с антителом METTL3, затем промывали 3 раза по 5 минут в 0,1% твине в трис-забуференном физиологическом растворе после 60-минутной инкубации во вторичных козьих антикроличьих антителах (разведение 1: 100000 в хемилюминесцентном блокирующем буфере, Кат .: SA00001-2, Proteintech, Роузмонт, Иллинойс, США). Затем мембраны инкубировали в SuperSignal ^TM West Femto (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) в течение 1 мин и визуализировали на Bio-Rad ChemiDoc MP. Белок METTL3 нормализовали по экспрессии α-TUBULIN с помощью ImageLab 4.1 программное обеспечение (Bio-Rad, Геркулес, Калифорния, США).

Анализ увеличения популяции миобластов C2C12

Для определения эффекта нокдауна Mettl3 количества клеток, миобласты C2C12, которые культивировались в 6-луночных чашках для культивирования клеток, подсчитывали с помощью автоматического счетчика клеток Moxi Z Mini (ORFLO Technologies, Ketchum, ID, США) через 12, 24, 48 и 72 ч после посева и трансфекции миРНК в питательную среду.

Иммуноцитохимия

Иммуноцитохимия использовалась для определения экспрессии eMHC.Миобласты C2C12 фиксировали в течение 20 мин в 4% параформальдегиде при комнатной температуре перед отмывкой 3 × 5 мин в PBS. Фиксированные миобласты C2C12 блокировали в течение 60 мин при комнатной температуре в 5% козьей сыворотке, затем инкубировали с супернатантом первичных антител eMHC (продукт гибридомы DSHB F1.652, F1.652 был депонирован в DSHB Blau, Helen M.) ⁴⁴ в течение ночи. при 4 ° C. Затем миобласты C2C12 промывали 3 раза по 5 мин в PBS и инкубировали во вторичных антителах (Alex Fluor ^® 488 козлиные антимышиные, Cat: A11029, Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), разведенных 1: 1000 в 1% козьих антителах. сыворотка.Hoechst 33342 использовали в качестве контрастного красителя для идентификации ядер, а окрашенные клетки визуализировали на цитометре Celigo S Imaging Cytometer (Nexcelom Bioscience, Лоуренс, Массачусетс, США).

Первичная изоляция MuSC мыши

Первичная изоляция MuSC мыши выполнялась, как описано ранее ³¹ . Мышей CMV- luc анестезировали изофлураном с последующим смещением шейных позвонков перед извлечением всех мышц задних конечностей. Мышцы инкубировали в переваривающем коктейле из DMEM с низким содержанием глюкозы и 2.5 мг / мл коллагеназы D (Roche, Базель, Швейцария) в течение 15 мин при 37 ° C. Затем была проведена физическая диссоциация с использованием системы GentleMACS (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Германия) с последующим добавлением Dispase II (исходная исходная концентрация 0,04 Ед / мл, Roche, Базель, Швейцария) и дополнительной 40-минутной инкубацией при 37 ° C. ° C. Дальнейшую физическую диссоциацию мышечной ткани проводили иглой 18-го размера. Суспензии клеток пропускали через предварительно промытый фильтр 100 мкМ, затем фильтр 40 мкМ для удаления дебриса.Оставшиеся клетки осаждали центрифугированием (700 × g, , 7 мин, 4 ° C) и ресуспендировали в буфере для лизиса эритроцитов (IBI Scientific, Dubuque, Айова, США) в течение 5 минут при комнатной температуре. Суспензию клеток снова осаждали, ресуспендировали в 1 мл коктейля конъюгированных с биотином первичных антител, специфичных к CD45 (2 мкл, клон 30-F11, Biolegend, Сан-Диего, Калифорния, США), CD31 (5 мкл, клон 390, Biolegend. , Сан-Диего, Калифорния, США), CD11b (5 мкл, клон M1 / ​​70, Biolegend, Сан-Диего, Калифорния, США) и Sca1 (5 мкл, клон D7, Biolegend, Сан-Диего, Калифорния, США) и инкубировали , на льду, 25 мин.Стрептавидиновые микрогранулы (12 мкл, Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Германия) добавляли к смеси клеточная суспензия / коктейль антител и инкубировали на льду в течение 10 мин. После инкубации смесь пропускали через предварительно промытые магнитные колонки (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Германия). Клетки осаждали и ресуспендировали в 1 мл раствора, содержащего антитела, специфичные для следующих белков: CD34 (eFluor450, clone ram34, Invitrogen eBioscience, Сан-Диего, Калифорния, США) α7-интегрин (AlexaFluor647, клон r2f, Ablab, Британская Колумбия, Канада. ) и стрептавидин (PE-Cy7, Biolegend, Сан-Диего, Калифорния, США).После 20 мин инкубации на льду суспензию клеток промывали, осаждали и ресуспендировали в 200 мкл раствора йодида пропидия (1: 100). Клетки CD34 ⁺ / α7-интегрин ⁺ / CD45 ^— / CD31 ^— / CD11b ^— / Sca1 ^— выделяли с помощью проточной цитометрии. Затем выделенные первичные мышиные MuSCs высевали на планшеты, покрытые ламинином (20 мкг / мл, Sigma, Сент-Луис, Миссури, США) и фрагментом рекомбинантного человеческого фибронектина RetroNectin ^® (15 мкг / мл, Takara Bio USA, Mountainview, CA , США) в той же питательной среде, что и для первичной культуры миобластов мыши.

Первичная трансфекция shРНК MuSC мыши

Для экспериментов in vitro первичные MuSC от мышей CMV- luc трансфицировали лентивирусами с короткой шпилькой, нацеленными на Mettl3 (sh2, клон TRCN0000039110; sh3, клон TRCN0000039111; sh3, клон TRCN0000039111; sh , clone TRCN0000039113, MISSION, Sigma, Сент-Луис, Миссури, США) или контрольный образец, не относящийся к млекопитающим (shCON, Cat: SHC002, MISSION, Sigma, Сент-Луис, Миссури, США) через 12 часов после посева. Свежую питательную среду заменяли через 48 часов после трансфекции и продолжали менять каждые 48 часов в течение 7 дней.

Для экспериментов по трансплантации первичные MuSC от мышей CMV- luc трансфицировали shCON, sh3, sh4 или комбинацией sh3 и sh4 (sh3 / 3) через 12 ч после посева. Через двадцать четыре часа после трансфекции MuSC собирали для трансплантации.

Первичная трансплантация MuSC мыши

Для экспериментов по первичной трансплантации первичные MuSC, выделенные от мышей CMV- luc из каждого состояния shRNA (shCON, sh3, sh4 и sh3 / 3), индивидуально ресуспендировали в PBS в концентрации 175 MuSC на 20 мкл PBS через 24 часа после трансфекции в культуру.Мышей с нокаутом NSG анестезировали изофлураном и в их ТА-мышцы вводили 20 мкл суспензии клеток MuSC. Каждая мышца ТА получала MuSC из одного состояния shRNA (т.е. shCON, sh3, sh4 и sh3 / 3) случайным образом, в общей сложности 8 повторов на каждое состояние для 16 мышей-реципиентов.

Для вторичной трансплантации TA-мышцы мышей-реципиентов первичного трансплантата собирали и переваривали, как описано в разделе выделения MuSC первичной мыши. Суспензию клеток, полученную из каждой ТА-мышцы, равномерно разделяли и инъецировали в две ТА-мышцы-реципиенты, получая в общей сложности 8 повторов на каждое состояние для 16 мышей-реципиентов.

Анализ люциферазы in vitro

Для определения влияния условий shРНК на пролиферацию MuSC после 7 дней культивирования первичные MuSC от мышей CMV- luc инкубировали в свежей питательной среде, содержащей 0,15 мг / мл D-люциферина (Gold Biotechnology , Сент-Луис, Миссури, США) в течение 15 мин при 37 ° C перед измерением на планшет-ридере SpectraMax M3 (Molecular Devices, Сан-Хосе, Калифорния, США).

Биолюминесцентная визуализация in vivo

Биолюминесцентная визуализация in vivo использовалась для отслеживания поведения MuSC после трансплантации.Мышей-реципиентов трансплантата анестезировали изофлураном и вводили 125 мкл 30 мг / мл D-люциферина перед визуализацией (Gold Biotechnology, Сент-Луис, Миссури, США). Биолюминесцентную визуализацию выполняли с использованием системы визуализации IVIS ^® Spectrum in vivo (PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Цифровые изображения были получены через 12 минут после инъекций и проанализированы с использованием программного обеспечения Living Image (PerkinElmer, Waltham, MA, США). Порог приживления был установлен на уровне 50 000 фотонов в секунду. Биолюминесцентные изображения были получены через 3, 11, 17, 25, 31 и 40 дней после первичной трансплантации.Для экспериментов по вторичной трансплантации биолюминесцентные изображения были получены через 35 дней после трансплантации.

Анализ конфлюэнции

Измерения конфлюэнции выполняли, как описано ранее ⁴⁵ .