сортировать: по датепо рейтингупо фильмупо годупериод времени: за неделюза месяцза полгодаза все время показывать: 10255075100200 41—50 из 680
прямая ссылка 28 июля 2012 | 02:08
прямая ссылка 6 июня 2012 | 02:10
прямая ссылка 22 мая 2012 | 11:17
прямая ссылка 26 апреля 2012 | 11:32
прямая ссылка 29 марта 2012 | 01:26
прямая ссылка 22 марта 2012 | 18:49
прямая ссылка 19 марта 2012 | 12:16
прямая ссылка 12 марта 2012 | 19:31
прямая ссылка 12 марта 2012 | 18:58
прямая ссылка 8 марта 2012 | 20:18показывать: 10255075100200 41—50 из 680 |
GGLME — Tymoshenko
- Dashboard
- Tymoshenko
- Words
- on the Page
- IF
All the latest publications in world and local media, social networks about Tymoshenko.
Need data for specific period?Choose dates or periods
The selection of archived data is possible only for a period starting from 2021-05-25 00:13:21.
Contact us if you need older data.
From: 2020-12-06 14:42:00 To: 2020-12-07 14:42:00Sorry, no data found / Извините, данные не найдены Sorry, no data found / Извините, данные не найдены Sorry, no data found / Извините, данные не найдены
Младший брат Джеймса Франко Дэйв женился на Элисон Бри
Звездные пары
81228Дэйв Франко и Элисон Бри
Спешим поздравить 31-летнего Дэйва Франко («Иллюзия обмана», «Мачо и ботан») и 34-летнюю Элисон Бри («Сообщество», «Безумцы»), которые теперь муж и жена: пара сыграла тайную свадьбу. Официальный представитель актрисы уже подтвердил эту информацию прессе, однако никаких деталей, даже дату бракосочетания, не сообщил. Не проболтался на этот раз и старший брат актера, Джеймс Франко, который в последние несколько месяцев неоднократно намекал, что пара вот-вот свяжет себя узами брака.
Новость, конечно, не стала громом среди ясного неба для близких друзей актеров, ведь они не скрывали, что собираются пожениться в ближайшее время. О помолвке пары стало известно еще в августе 2015 года, и с тех пор влюбленные потихоньку готовились к свадьбе.
Встречаться Дэйв и Элисон начали еще в 2012 году, и все это время старались оберегать свой роман от излишнего внимания посторонних — в сети практически не найти совместных фотографий влюбленных, не то что их рассказов о друг друге. Возможно, «слабину» даст Джеймс Франко, и мы все-таки увидим свадебные снимки!
Элисон Бри и Дэйв Франко
Элисон Бри, Дэйв и Джеймс Франко
Джеймс и Дэйв Франко
Фото Gettyimages.ru
#похудетьсемей Instagram posts (photos and videos)
🤔МОЖНО ЛИ СНИЗИТЬ ВЕС САМОМУ? Конечно можно! Можно найти в интернете диету, комплекс упражнений, поставить цель и начать ежедневно всё это выполнять. Можно. И некоторые люди добиваются таким образом замечательных результатов. 👤Но таких людей оооочень не много — людей, самостоятельно добивающихся значительных результатов, процентов пять. Остальное большинство либо заканчивает на моменте «найти в интернете», либо максимально продерживается «на диете» дня три. Не более… ❓Почему это происходит? Да потому, что снижение веса — это ежедневный, рутинный, скучный и неприятный процесс. Мозг и тело, всячески сопротивляясь насилию, стараются переключиться на другие дела и мы невольно «забываем» о данном себе слове не есть плюшки или вечером выйти на пробежку. 🤓Каков выход? А выход — окружить себя единомышленниками 👪👨👩👧👨👩👧👦👨👩👦👦. Людьми, которые также как и вы, находятся в процессе. В таком коллективе всегда есть кто-то, кто в данный момент видит минус на весах. И это придает силы остальным тоже двигаться к цели. В нашем коллективе есть люди общительные 😄, которым для достижения цели нужна поддержка и они с удовольствием ее берут. Есть наблюдатели 🤔, которым комфортно, наблюдая и просто читая, что пишут остальные. Есть постоянные участники 🙋, которые годами получают удовольствие, принимая участие во всех наших школах, мастер-классах, вечеринках, школах. А есть «подснежники»🌱, которые появляются только тогда, когда обычная калорийная жизнь затянула и нужно вновь приводить себя в форму. ⠀ Хотите дойти до своей цели? Не считаете себя супердисциплинированными? — Заходите к нам! Добро пожаловать! ⠀ ⚜️Напишите мне в Директ ваш рост, вес и номер телефона для связи. За 30 минут телефонного разговора составлю Вам план питания под вас и ваш бюджет #хочупохудеть #минусразмер #консультантгербалайф #снизитьвес #похудетьнадекрете #мамочки #похудетькараганда #похудетьсемей #yтродoбpое #отраcсвета
Absara Cosmetics S.A.P.I DE C.V. — 612455 — 18.02.2021
- Способ доставки:
- ЧЕРЕЗ ИБП
- Товар:
- Наркотики
- Получатель:
Имя получателя
г.Даниэль Чамлати
Название получателя
Главный исполнительный директор
- Absara Cosmetics S.A.P.I DE C.V.
Autopista Mexico — Toluca Km. 53,5 Av. Ind. Farmac. Accesso
Parque Industrial Dona Rosa Planta II
52004 Эмилиано Сапата,
Мексика
- Отдел выдачи:
- Центр оценки и исследования лекарственных средств | CDER
США
Предупреждающее письмо 320-21-26
18 февраля 2021 г.
Уважаемый г-н.Чамлати:
Ваша фирма зарегистрирована как производитель лекарств для людей. Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) провело тестирование потребительского антисептического лекарственного средства для протирания рук (также называемого потребительским дезинфицирующим средством для рук), помеченного как БЕЗ АРОМАТОВ VLANC + PLUR HAND SANITIZER RINSE FREE, СФОРМУЛИРОВАННЫЙ С 70% АЛКОГОЛЯ С АЛОЭ ВЕРОЙ И ГЛИЦЕРИН. Этот лекарственный продукт был отмечен как произведенный на вашем предприятии, Absara Cosmetics S.A.P.I. De C.V., FEI 3012333567, на Autopista Mexico — Toluca Km.53,5 Av. Ind. Farmac. Accesso, Parque Industrial Dona Rosa Planta II, Эмилиано Сапата 52004 Мексика. После попытки импортировать БЕЗ АРОМАТОВ VLANC + PLUR ДЕЗИРУЮЩИЙ СРЕДСТВО ДЛЯ РУК БЕЗ ОПОЛАСКИВАНИЯ С 70% СПИРТА С АЛОЭ ВЕРОЙ И ГЛИЦЕРИНОМ в Соединенные Штаты, оно было задержано и отказано в допуске на границе.
Результаты лабораторного тестирования FDA партии этого продукта, задержанного на границе, демонстрируют, что этот лекарственный продукт, помеченный как произведенный на вашем предприятии, фальсифицирован по смыслу раздела 501 (c) Федерального закона о пищевых продуктах, лекарствах и косметических средствах. (Закон или Закон FD&C), 21 U.S.C. 351 (c), в том смысле, что его сила, чистота или качество ниже тех, которыми он якобы обладает. Кроме того, этот продукт фальсифицирован в соответствии с разделом 501 (a) (2) (B) Закона о FD&C (21 USC 351 (a) (2) (B)), поскольку субпотентность демонстрирует, что гарантия качества на вашем предприятии не функционирует в соответствии с требованиями действующей надлежащей производственной практики (CGMP).
Нарушения подделки
БЕЗ АРОМАТОВ VLANC + PLUR ДЕЗИРУЮЩИЙ СРЕДСТВО ДЛЯ РУК БЕЗ ОПОЛАСКИВАНИЯ С 70% СПИРТА С АЛОЭ ВЕРОЙ И ГЛИЦЕРИНОМ, маркировано как произведенное на вашем предприятии, содержит 70% объема / объема (об. / Об.) Активного ингредиента спирта (этанола). ).Однако лабораторные испытания FDA партии этого продукта, задержанного на границе, показали, что лекарственный продукт содержал только 58% об. Этанола. Это лекарственное средство для дезинфекции рук фальсифицировано в соответствии с разделом 501 (c) Закона о FD&C в том смысле, что активный ингредиент этанола присутствует в продуктах в количествах ниже, чем указано на его этикетке.
CDC рекомендует 1 , что, если мыло и вода недоступны, потребители используют дезинфицирующее средство для рук на спиртовой основе, которое содержит не менее 60% спирта (этанола).Это минимальная концентрация активного ингредиента этанола, указанная в Предварительной заключительной монографии по медицинским антисептическим лекарственным средствам 1994 года (59 FR 31402) с дальнейшими поправками, внесенными в статью «Безопасность и эффективность потребительских антисептиков; Противомикробные лекарственные препараты для местного применения, отпускаемые без рецепта человека; Предлагаемая поправка к предварительной окончательной монографии; Возобновление административного учета », Предлагаемое правило, 81 FR 42912 (30 июня 2016 г.).
16 октября 2020 года FDA провело с вами телеконференцию.Хотя субпотенциальный лекарственный препарат, описанный выше, был отправлен в Соединенные Штаты, информация, доступная FDA, показала, что все ваши дезинфицирующие средства для рук были задержаны, отказали в допуске на границе и не ввозились в Соединенные Штаты. Мы запросили дополнительную информацию о ваших операциях CGMP, включая методы тестирования вашего готового лекарственного препарата, документацию, показывающую эквивалентность методам тестирования USP, и ваше расследование субпотентной партии, протестированной FDA. В своих ответах вы предоставили подробную информацию о внутреннем тестировании, которое вы используете для тестирования своих лекарственных препаратов, но не предоставили никакой документации для проверки метода или описания эквивалентности соответствующим методам тестирования Фармакопеи США.Представленные методы продемонстрировали необоснованные отличия от методов Фармакопеи США, не описывали внутренний стандарт, пригодность системы и содержали ошибки в расчетах. Отсутствие адекватных методов тестирования является нарушением требований CGMP (см. 21 CFR 211.160).
В дополнение к вашим методам тестирования вы представили результаты вашего исследования субпотентной партии, протестированной FDA. Ваше расследование пришло к выводу, что проблема субпотентности ограничивается только партией, протестированной FDA.Однако вы не представили адекватного научного обоснования этого вывода. Поэтому неясно, правильно ли вы определили основную причину и адекватно ли расширили расследование, чтобы включить все затронутые продукты и партии. Кроме того, ваше расследование не включало обзор ваших методов испытаний, лабораторных операций и аналитических результатов. Неспособность тщательно расследовать любое необъяснимое несоответствие или отказ партии или любого из ее компонентов соответствовать какой-либо из ее спецификаций, независимо от того, была ли партия уже распределена, является нарушением требований CGMP (см. 21 CFR 211.192).
В ответ на это письмо предоставьте следующее:
• Подробное последующее расследование того, как описанные выше лекарственные средства для дезинфекции рук, которые были помечены как содержащие 70% этанола, на самом деле содержали в среднем 58% этанола, соответственно. Это последующее расследование должно идентифицировать конкретные партии в каждой идентифицированной импортной позиции, которые могли быть затронуты, и включать в себя тщательный анализ лабораторных методов и процедур, используемых для анализа пораженных партий.
• Список всего сырья, используемого для производства ваших лекарственных средств для дезинфекции рук, включая названия, адреса и контактную информацию поставщиков.
• Список всех партий любых лекарственных средств для дезинфекции рук, отправленных в Соединенные Штаты вашей фирмой, и полная выверка всех материалов, которые вы распространили.
• Копии полных записей партий для всех партий, распространенных в США.
• Список соответствующих методов и спецификаций химических и микробиологических тестов, используемых для анализа каждой партии ваших компонентов и лекарственного препарата перед принятием решения об утилизации партии, а также соответствующие письменные процедуры.
Недостаточность лекарственных средств для дезинфекции рук, заявленных или маркированных как произведенные на вашем предприятии, демонстрирует, что обеспечение качества в вашем учреждении не работает в соответствии с требованиями CGMP в соответствии с разделом 501 (a) (2) (B) Закона о FD&C. 2
Рекомендовано консультантом CGMP
Исходя из характера нарушений, которые мы выявили в вашей фирме, мы настоятельно рекомендуем нанять консультанта, квалифицированного в соответствии с 21 CFR 211.34, чтобы оценить вашу деятельность и помочь вашей фирме в соблюдении требований CGMP, если ваша фирма намеревается возобновить производство лекарств для рынка США. Мы также рекомендуем, чтобы квалифицированный консультант провел комплексный аудит всей вашей деятельности на предмет соответствия CGMP и чтобы консультант оценил завершенность и эффективность ваших корректирующих и предупреждающих действий, прежде чем вы приступите к разрешению статуса соответствия вашей компании с FDA. Использование вами консультанта не освобождает вашу фирму от обязанности соблюдать CGMP.Исполнительное руководство вашей фирмы по-прежнему несет ответственность за устранение всех недостатков и системных недостатков для обеспечения постоянного соблюдения требований CGMP.
Заключение
Нарушения, указанные в этом письме, не являются исчерпывающим списком нарушений, связанных с вашими лекарственными препаратами. Вы несете ответственность за расследование и определение причин любых нарушений, а также за предотвращение их повторения или возникновения других нарушений.
Обратите внимание, что FDA поместило все лекарства и лекарственные препараты, производимые вашей фирмой, в Уведомление об импорте 66-78 4 февраля 2021 г., поскольку методы, используемые и средства контроля, используемые для производства, обработки, упаковки или хранения этих продуктов, не отображаются. соответствовать действующей надлежащей производственной практике в соответствии с разделом 501 (a) (2) (B) Закона о FD&C.Наркотики и лекарственные препараты, которые выглядят фальсифицированными или имеют неправильную марку, могут быть задержаны или отказаны в приеме без медицинского осмотра.
Все лекарственные препараты и лекарственные препараты, производимые вашей фирмой, могут оставаться в списке в этом уведомлении об импорте до тех пор, пока не появятся доказательства, подтверждающие, что условия, которые привели к возникновению видимости нарушения, были устранены, и Агентство будет уверено, что будущие записи будут внесены в соблюдение Закона. Это может включать в себя инспекцию до того, как Агентство будет рассматривать видимость фальсификации.
Если вы решите в будущем производить лекарства для США, запросите встречу с регулирующими органами для обсуждения корректирующих действий.
Это письмо уведомляет вас о наших выводах и дает вам возможность устранить вышеуказанные недостатки. После получения этого письма ответьте в этом офисе в письменной форме в течение 15 рабочих дней. Укажите, что вы сделали для устранения нарушений и предотвращения их повторения. В ответ на это письмо вы можете предоставить дополнительную информацию для нашего рассмотрения, поскольку мы продолжаем оценивать вашу деятельность и практику.Если вы не можете сделать это в течение 15 рабочих дней, укажите причины задержки и график завершения.
Отправьте свой электронный ответ по адресу [email protected].
Укажите свой ответ с помощью FEI 3012333567 и ATTN: Мариса Хейн.
С уважением,
/ S /
Фрэнсис Годвин
Директор
Управление производственного качества
Управление соответствия
Центр оценки и исследований лекарственных средств
cc:
Дэвид Леннарц, У.S. Agent
Registrar Corp.
144 Research Drive
Hampton, VA 23666 USA
______________________
1 https://www.cdc.gov/handwashing/hand-sanitizer-use.html
2 В связи с повышенным спросом на дезинфицирующие средства для рук на спиртовой основе во время пандемии COVID-19, FDA опубликовало Руководство для промышленности: Временная политика по приготовлению определенных дезинфицирующих средств для рук на спиртовой основе во время чрезвычайной ситуации в области общественного здравоохранения ( COVID-19) 19 марта 2020 г., а затем несколько раз обновлял руководство, последний раз — 10 февраля 2021 г.Это руководство сообщает о временной политике Агентства, согласно которой мы не намерены принимать меры против фирм за нарушения CGMP в соответствии с разделом 501 (a) (2) (B) Закона о FD&C, если такие фирмы готовят дезинфицирующие средства для рук на спиртовой основе для использования потребителями (или для использования в качестве средства для массажа рук медицинским персоналом) во время чрезвычайной ситуации в области общественного здравоохранения при наличии определенных обстоятельств, описанных в руководстве. Эти обстоятельства включают приготовление дезинфицирующих средств для рук с использованием только ингредиентов и формул, указанных в руководстве.В дополнение к результатам тестирования на нарушение, подробно описанным выше, которые демонстрируют неэффективность дезинфицирующих средств для рук, маркированных как произведенные на вашем предприятии, обзор предполагаемых составов на этикетке лекарственных препаратов также указывает на то, что этот продукт не подготовлен в соответствии с временным набором правил FDA. вперед в руководстве. Следовательно, этот продукт не подпадает под временную политику Агентства, запрещающую принимать меры против фирм, производящих дезинфицирующие средства для рук, за нарушение раздела 501 (a) (2) (B) Закона о FD&C.
SAPI Plates — Магазин гоплитовых доспехов
Ограничения на покупку, владение или владение бронежилетами следующие:
Покупка, владение или владение бронежилетами является нарушением Федерального закона США. Кроме того, различные штаты также приняли законы, ограничивающие покупку, владение или владение бронежилетами лицами, осужденными за преступления, связанные с наркотиками, некоторые другие тяжкие преступления или другие насильственные преступления.Приобретая бронежилеты в Hoplite Armor, LLC, вы подтверждаете и подтверждаете, что:
- Вы не были осуждены за уголовное преступление.
- Конечный пользователь не был осужден за какое-либо другое преступление, которое ограничивало бы его способность приобретать, владеть или владеть бронежилетами в соответствии с любыми применимыми постановлениями или ограничениями местных, государственных или федеральных законов.
- Конечный пользователь не будет использовать бронежилеты, приобретенные у Hoplite Armor, LLC, в каких-либо преступных целях.
- Конечный пользователь старше 18 лет.
- Конечный пользователь не будет перевозить или использовать какие-либо продукты Hoplite Armor за пределами США.
Hoplite Armor, LLC оставляет за собой право по собственному усмотрению отказать в продаже бронежилетов любому физическому или юридическому лицу. Кроме того, продажа бронежилетов жителям Коннектикута через Интернет строго запрещена, за исключением случаев, когда продажа осуществляется определенным сотрудникам правоохранительных органов или военнослужащим, либо посредством прямой сделки.
Hoplite Armor не отправляет товары за пределы США в соответствии с правилами ITAR.Приобретая, владея или владея системами Hoplite Armor, конечный пользователь подтверждает, что никакие продукты Hoplite Armor не будут транспортироваться или использоваться за пределами США.
Все утверждения, содержащиеся в данном документе или в любых других связанных публикациях Hoplite любого рода, не предназначены для предоставления юридических консультаций в какой-либо форме или форме. Настоятельно рекомендуется, чтобы клиенты провели разумную комплексную проверку перед покупкой, владением или владением бронежилетами, чтобы избежать каких-либо юридических последствий.
Положения и условия
ВНИМАТЕЛЬНО ПРОЧИТАЙТЕ СЛЕДУЮЩИЕ УСЛОВИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПЕРЕД ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДАННОГО ВЕБ-САЙТА. Все пользователи этого сайта соглашаются с тем, что доступ к нему и его использование регулируются следующими положениями и условиями, а также другим применимым законодательством. Если вы не согласны с этими условиями, пожалуйста, не используйте этот сайт.
Авторское право
Все содержимое этого сайта, включая, помимо прочего, текст, графику или код, защищено авторским правом как коллективная работа в соответствии с законами США и другими законами об авторских правах и является собственностью Hoplite Armor LLC.Коллективная работа включает в себя работы, лицензированные ООО «Хоплит Армор». Авторские права 2015, Hoplite Armor LLC ВСЕ ПРАВА ЗАЩИЩЕНЫ. Разрешается копировать в электронном виде и распечатывать бумажные копии частей этого сайта с единственной целью размещения заказа в Hoplite Armor LLC или покупки продукции Hoplite Armor LLC. Вы можете отображать и подчиняться любым явно заявленным ограничениям или ограничениям, касающимся конкретного материала, загружать или распечатывать части материала из различных областей сайта исключительно для вашего собственного некоммерческого использования или размещать заказ в Hoplite Armor LLC и покупать Продукция ООО «Гоплит Армор».Любое другое использование, включая, помимо прочего, воспроизведение, распространение, отображение или передачу содержимого этого сайта, строго запрещено, если только это не разрешено Hoplite Armor LLC. Вы также соглашаетесь не изменять и не удалять какие-либо уведомления о правах собственности из материалов, загруженных с сайта.
Товарные знаки
Все товарные знаки, знаки обслуживания и торговые наименования Hoplite Armor LLC, используемые на сайте, являются товарными знаками или зарегистрированными товарными знаками Hoplite Armor LLC
Отказ от гарантий
Система (-ы) бронежилета, продаваемая в связи с этим, не должна иметь дефектов материалов и изготовления в течение 60 месяцев с даты выпуска.ПО ИСТЕЧЕНИИ СРОКА ПРОДУКТ НЕ НЕСЕТ НИКАКИХ ГАРАНТИЙ, независимо от сертификации или маркировки в соответствии со стандартами NIJ, и не будет работать в соответствии с указанными спецификациями. Hoplite Armor не несет никакой ответственности за любое использование или неправильное использование любых продуктов, связанных с броней.
Любая система бронежилета, которая интенсивно использовалась (например, умеренные и сильные вмятины или изгибы в броне, трещины или разрывы на лицевой стороне, панели сильно изношены и изношены), независимо от ее возраста, БУДЕТ РАССЧИТАНО. ИСТЕЧИВАЕТСЯ И АВТОМАТИЧЕСКИ ОТКЛЮЧАЕТ ЛЮБУЮ ГАРАНТИЮ ВО ВСЕХ ОТНОШЕНИЯХ, ВКЛЮЧАЯ, НО НЕ ОГРАНИЧИВАЯСЬ, АННУЛИРОВАНИЕ ЛЮБОЙ ГАРАНТИИ НА БАЛЛИСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.
Hoplite Armor LLC не заявляет и не гарантирует, что функции, содержащиеся на сайте, будут бесперебойными или безошибочными, что дефекты будут исправлены или что этот сайт или сервер, который делает сайт доступным, не содержат вирусов или других вредоносных составные части. Hoplite Armor LLC не дает никаких гарантий или заверений в отношении использования материалов на этом сайте с точки зрения их правильности, точности, адекватности, полезности, своевременности, надежности и т. Д.В некоторых штатах не допускаются ограничения или исключения из гарантий, поэтому вышеуказанные ограничения могут не относиться к вам.
Пожалуйста, проверьте всю броню при получении, чтобы убедиться в отсутствии дефектов или повреждений, вызванных транспортировкой. Компания Hoplite Armor должна быть уведомлена в течение 7 дней с момента доставки для решения любых потенциальных проблем по гарантии. Если обнаружены какие-либо дефекты или повреждения, пожалуйста, прекратите использование и немедленно сообщите об этом по адресу: [email protected] с фотографиями и информацией о заказе.
Ограничение ответственности
Hoplite Armor LLC не несет ответственности за какие-либо особые или косвенные убытки, возникшие в результате использования или невозможности использования материалов на этом сайте или производительности продуктов, даже если Hoplite Armor LLC была уведомлена о возможности таких повреждений.Применимое законодательство может не допускать ограничения исключения ответственности или случайных или косвенных убытков, поэтому вышеуказанное ограничение или исключение может не относиться к вам.
Типографические ошибки
В случае, если продукт Hoplite Armor LLC ошибочно указан по неправильной цене, Hoplite Armor LLC оставляет за собой право отказать или отменить любые заказы, размещенные на продукт, указанный по неверной цене. Hoplite Armor LLC оставляет за собой право отклонить или отменить любые такие заказы, независимо от того, был ли заказ подтвержден и с вашей кредитной карты снята оплата.Если с вашей кредитной карты уже была снята оплата за покупку и ваш заказ отменен, Hoplite Armor LLC предоставит кредит на ваш счет кредитной карты в размере неверной цены.
Условия
Эти условия применяются к вам после вашего доступа к сайту и / или завершения процесса регистрации или совершения покупок. Эти условия или любая их часть могут быть прекращены Hoplite Armor LLC без предварительного уведомления в любое время и по любой причине.Положения, касающиеся авторских прав, товарных знаков, отказа от ответственности, ограничения ответственности, компенсации и прочего, остаются в силе после прекращения действия.
Уведомление
Hoplite Armor LLC может доставить вам уведомление по электронной почте, посредством общего уведомления на сайте или другим надежным способом по адресу, который вы предоставили Hoplite Armor LLC.
Разное
Использование вами этого сайта регулируется во всех отношениях законами штата Монтана, США.S.A., без учета положений о выборе права, а не в соответствии с Конвенцией ООН 1980 г. о договорах международной купли-продажи товаров. Вы соглашаетесь с тем, что юрисдикция и место проведения любого судебного разбирательства, прямо или косвенно вытекающего из этого сайта или связанного с ним (включая, помимо прочего, покупку продукции Hoplite Armor LLC), будут находиться в государственных или федеральных судах, расположенных в округе Флэтхед, штат Монтана. . Любые основания для иска или претензии, которые могут возникнуть у вас в отношении сайта (включая, помимо прочего, покупку продуктов Hoplite Armor LLC), должны быть предъявлены в течение одного (1) года после возникновения претензии или основания для иска.Неспособность Hoplite Armor LLC настаивать на строгом выполнении какого-либо положения настоящих условий не должна толковаться как отказ от какого-либо положения или права. Ни поведение сторон, ни торговая практика не должны приводить к изменению каких-либо из этих условий. Hoplite Armor LLC может передать свои права и обязанности по настоящему Соглашению любой стороне в любое время без предварительного уведомления.
Использование участка
Преследование в любой форме или в любой форме на сайте, в том числе по электронной почте, в чате или с использованием нецензурной лексики или ненормативной лексики, строго запрещено.Выдача себя за других, включая Hoplite Armor LLC или другого лицензированного сотрудника, хозяина или представителя, а также других участников или посетителей сайта запрещена. Вы не можете загружать, распространять или иным образом публиковать через сайт любой контент, который является клеветническим, дискредитирующим, непристойным, угрожающим, нарушающим права на неприкосновенность частной жизни или гласности, оскорбительным, незаконным или иным образом нежелательным, который может представлять собой или поощрять уголовное преступление, нарушать права любой стороны или которые могут иным образом повлечь за собой ответственность или нарушить какой-либо закон.Вы не можете загружать коммерческий контент на сайт или использовать сайт, чтобы побуждать других присоединиться или стать членами любой другой коммерческой онлайн-службы или другой организации.
Заявление об отказе от ответственности
Hoplite Armor LLC не просматривает и не может просматривать все сообщения и материалы, размещенные или созданные пользователями, получающими доступ к сайту, и не несет никакой ответственности за содержание этих сообщений и материалов. Вы признаете, что, предоставляя вам возможность просматривать и распространять пользовательский контент на сайте, Hoplite Armor LLC просто действует как пассивный канал для такого распространения и не берет на себя никаких обязательств или обязательств, связанных с любым контентом или действиями на сайте. сайт.Тем не менее, Hoplite Armor LLC оставляет за собой право блокировать или удалять сообщения или материалы, которые она считает (а) оскорбительными, дискредитирующими или непристойными, (б) мошенническими, вводящими в заблуждение или вводящими в заблуждение, (в) нарушающими авторские права, товарный знак или же; другое право интеллектуальной собственности другого лица или (d) оскорбительное или иным образом неприемлемое для Hoplite Armor LLC по ее собственному усмотрению.
Компенсация
Вы соглашаетесь возместить, защитить и обезопасить Hoplite Armor LLC, ее должностных лиц, директоров, сотрудников, агентов, лицензиаров и поставщиков (совместно именуемые «Поставщики услуг») от всех убытков, расходов, убытков и затрат, включая разумных адвокатов ‘сборы, возникшие в результате любого нарушения этих условий или любой деятельности, связанной с вашей учетной записью (включая небрежное или противоправное поведение) вами или любым другим лицом, осуществляющим доступ к сайту с помощью вашей учетной записи в Интернете.
Сторонние ссылки
В попытке повысить ценность для наших посетителей, Hoplite Armor LLC может ссылаться на сайты третьих сторон. Однако, даже если третья сторона является аффилированной с Hoplite Armor LLC, Hoplite Armor LLC не имеет никакого контроля над этими связанными сайтами, каждый из которых имеет отдельные методы конфиденциальности и сбора данных, независимо от Hoplite Armor LLC. Эти связанные сайты предназначены только для вашего удобства, поэтому вы получаете к ним доступ на свой страх и риск.Тем не менее, Hoplite Armor LLC стремится защитить целостность своего веб-сайта и размещенных на нем ссылок, и поэтому запрашивает любые отзывы не только о своем собственном сайте, но и о сайтах, на которые он ссылается (в том числе, если конкретная ссылка не работает). .
ESAPI против SAPI: в чем разница между ними?
Безопасность, точность и функциональность — все это должно сопровождаться качественной бронежилетом. Несмотря на то, что промышленность бронежилетов регулярно заполняется многими брендами и конкурентоспособными материалами, два типа бронежилетов выделяются как столпы передового опыта: ESAPI и SAPI.Решение о том, какой из них лучше всего подходит для вас, — важное решение, требующее тщательного рассмотрения. И бронежилет ESAPI, и бронежилет SAPI предназначены для защиты тела от стрелкового оружия. ESAPI тяжелее на 27% и обеспечивает более надежную защиту от бронебойных снарядов, чем SAPI. Они оба одинаковой формы.
Военные США начали постепенно отказываться от бронежилета SAPI в пользу бронежилета ESAPI , что должно вам кое-что сказать. Если вы когда-нибудь задумывались о размерах, силе, строении или конструкции этих двух премьер-стилей бронежилетов, читайте дальше, чтобы узнать больше.
Основные различия между ESAPI и SAPI Body ArmorАббревиатура SAPI означает «Защитная вставка для стрелкового оружия», а ESAPI означает «Расширенная защитная вставка для стрелкового оружия». Различия незначительны в названии, но огромны в характеристиках каждой из этих тактических вставок для бронежилета. Хотя ESAPI и SAPI представляют собой вставки для бронежилетов, которые можно увидеть в рюкзаках или рукавах, эти вставки для бронежилетов для курток надежны и невероятно популярны.
Бронежилет предназначен для защиты от боеприпасов.Причина, по которой вам нужны бронежилеты, — это физическая безопасность от различных уровней баллистических угроз. SAPI, ESAPI и все остальные виды бронежилетов имеют свой собственный уровень защиты. SAPI — отличный бронежилет, обеспечивающий вполне адекватную защиту от огня стрелкового оружия. Однако ESAPI имеет повышенную безопасность; это заложено в названии и может защитить от большей силы бронебойных боеприпасов.
Чтобы разобрать основные различия между двумя типами бронежилетов, вам необходимо просмотреть их статистику рядом.В приведенной ниже таблице указаны вес, коэффициент защиты, размер, стоимость и конструкция материала, а также вердикт о том, какой из двух вариантов лучше, так что вы получите четкое представление об эволюции бронежилетов.
Характеристика | ESAPI | SAPI | Вердикт | |
Вес | На 27% тяжелее SAPI | Легче, чем SAPI | Легче, чем L0284 | : Легче, чем L0284, ESAPI : 9006 маневр в |
NIJ Threat Protection | IV | II | ESAPI : Бронежилет останавливает бронебойные пули, выпущенные с высокой скоростью из винтовок | |
Размер | Extra Small: 7.25 ″ x 11,5 ″ Маленький: 8,75 ″ x 11,75 ″ Средний: 9,5 ″ x 12,5 ″ Большой: 10,125 ″ x 13,25 ″ Очень большой: 11 ″ x 14 ″ | Очень маленький: 7,25 ″ x 11,5 ″ Малый: 8,75 ″ x 11,75 ″ Средний: 9,5 ″ x 12,5 ″ Большой: 10,125 ″ x 13,25 ″ Очень большой: 11 ″ x 14 дюймов | То же | |
Конструкция материала | Карбид бора | Карбид кремния | ESAPI : карбид бора из самых прочных материалов брони и даже используется на бронетехнике |
Как видите, основное различие между этими двумя бронежилетами — это вес.Несмотря на то, что военные использовали бронежилеты SAPI в течение многих лет, они не выдерживали огня из мощных винтовок. Теперь военнослужащие используют более прочный бронежилет, который называется ESAPI. Материалы, из которых изготовлен этот более прочный бронежилет, немного отличаются, но на них следует обратить внимание. Именно из-за этих материалов он более мощный, но и тяжелый. Прочтите, чтобы узнать больше о том, что делает бронежилеты более прочными.
Чем крепче бронежилет ESAPI?
Вставки бронежилета ESAPI стали более прочными за счет смеси материалов, из которых они состоят.Основной ингредиент вставок для бронежилетов, таких как SAPI или ESAPI, известен как «черный алмаз» или карбид бора. При смешивании с более мягкими материалами, такими как полиуретан или силикон, бронежилет становится более устойчивым к баллистическим воздействиям.
Бронежилет ESAPI прочнее из-за смеси полиуретана и карбида бора. Пластины обычно тяжелее пластин SAPI из-за большей плотности карбида бора в составе пластин. Бронежилеты SAPI и ESAPI предназначены для использования с бронежилетом и под мягкой подкладкой.Однако ESAPI прочнее, потому что в нем больше карбида бора, а также потому, что он смешан с полиуретаном.
Процесс производства баллистических пластин | Группа защиты Дания
NIJ Уровни защиты от угроз и где ESAPI и SAPI стоят
Национальный институт юстиции выставляет баллистические стандарты для бронежилетов и по шкале оценок. Эта шкала показывает максимальный размер снаряда и баллистическую силу, которую пластина бронежилета может выдержать, не допуская пробития.Самые последние стандарты были выпущены в 2008 году и назывались Стандарт 0101.06. В этой таблице подробно описана классификация типов личных бронежилетов в зависимости от уровня баллистических характеристик. Классификация основана на количестве, которое должно быть минимальной защитой любой части бронежилета. Классификация от NIJ также касается расстояний и углов, с которых ведется баллистический выстрел.
Бронежилет типа | Максимальный калибр / сила брони может выдержать |
IIA | Цельнометаллическая куртка 9 мм, с массой 8 граммов при скорости 1225 фут / сЦельнометаллическая куртка S&W калибра 40, масса 11,7 грамма при скорости 1155 футов в секунду |
II | Цельнометаллическая куртка 9 мм, масса 8 граммов при скорости 1305 футов / секунду. острие с массой 10,2 грамма при скорости 1430 футов в секунду |
IIIA | .357 SIG цельнометаллическая оболочка Flat Nose массой 8,1 грамма при скорости 1470 футов в секунду. полый наконечник с рубашкой массой 15,6 грамма при скорости 1430 фут / сек |
III (жесткая броня или пластинчатые вставки) | 7.62-миллиметровая цельнометаллическая стальная оболочка (M80) с массой 9,6 грамма при скорости 2780 фут / с |
III (мягкая / гибкая броня) | Цельнометаллическая оболочка 7,62 мм со стальной рубашкой (M80) с массой 9,6 грамма при скорости 2780 фут / с |
IV (бронебойная винтовка) | бронебойные пули калибра 0,30 (M2 AP) массой 10,8 грамма при скорости 2880 фут / с |
Как видите, существенные различия между бронежилетом ESAPI и SAPI body armor сводятся к уровню защиты и разнице в весе.ESAPI обеспечивает защиту от выстрела из мощной винтовки и считается бронежилетом NIJ с уровнем защиты IV, высшим рейтингом NIJ. Между тем, бронежилет SAPI имеет только уровень II по NIJ Threat Protection, способный остановить пулю с цельнометаллической оболочкой калибра 9 мм или 0,357. Любого из этих типов бронежилетов достаточно для обеспечения их уровня защиты от угроз. Однако перед принятием решения крайне важно оценить свои потребности в безопасности. Читайте дальше, чтобы получить более подробную информацию о том, когда использовать бронежилет ESAPI и когда использовать бронежилет SAPI.
Когда использовать SAPI Body Armor?Бронежилет преобразует вашу уверенность и душевное спокойствие. Защита с помощью бронежилетов открывает вам множество возможностей. Непросто определить, какой тип защиты вы выбрали в своей ситуации. Защита стрелкового оружия жизненно важна, если вы находитесь в правоохранительных органах, на близком расстоянии или рискуете попасть под огонь из малокалиберного пистолета. Бронежилет SAPI — отличный выбор по разным причинам. Если вы воспринимаете угрозы с помощью баллистики на театре военных действий или на ходу как средство быстрого реагирования, вам может потребоваться бронежилет SAPI.Ниже приведены некоторые из наиболее распространенных случаев, когда вы можете использовать SAPI Body armor.
Когда вы держите в руках стрелковое оружие
Многие сотрудники, не связанные с оказанием первой помощи, связаны с опасными ситуациями, когда вам может понадобиться дополнительное оружие, чтобы защитить себя или предотвратить опасность. Однако, если у вас есть рука, есть шанс, что оружие могут отобрать у вас и использовать против вас. В этом случае вам нужна защита от силы вашего собственного оружия. Если вы сами держите в руках стрелковое оружие, вам нужен бронежилет SAPI .Бронежилет SAPI помогает избежать повреждений и травм в результате выстрела кем-то, кто берет ваше оружие. Вот некоторые из наиболее распространенных профессий и ситуаций, когда бронежилеты SAPI помогут защитить вас от превращения в цель из собственного стрелкового оружия:
- Если вы занимаетесь доставкой денег, перемещаясь по заранее спланированным маршрутам; в ситуации с деньгами, которые уязвимы или могут стать целью грабителей
- Если вы большую часть времени являетесь охранником в неподвижном положении; если ваш путь охраны предсказуем или вы один
- Если вы заметный полицейский, патрулирующий улицы города, ваше оружие на виду делает вас мишенью для плохих людей, которые могут забрать ваше оружие.
Когда вам нужна мобильность
К этому моменту мы знаем, что бронежилет SAPI слабее ESAPI. Однако, поскольку пластины тоньше и сделаны из более легкого материала, они весят почти на 27% меньше, чем вставки бронежилета ESAPI. Более легкие бронежилеты, такие как пластины SAPI, идеально подходят для определенных ситуаций, когда вам нужна мобильность. Обладая подвижностью, позволяющей убегать, перемещаться из-под огня в безопасное место, вести бой или выполнять физические задачи в тяжелых условиях, бронежилет компенсирует неспособность бронежилета противостоять баллистике мощных винтовок.
Иногда важнее маневрирование, подвижность и скорость. Ниже приведены некоторые ситуации или задачи, которые вы можете выполнить, когда более легкий бронежилет SAPI является правильным выбором.
- Как патрульный полицейский на велосипеде, пешком или участвующий в рейдах
- Как курьер, которому может потребоваться избежать опасных ситуаций
- Как боевой солдат в тактических городских условиях, где необходимы энергичные физические маневры
Когда вы в основном находитесь в помещении
Некоторые люди, которые носят бронежилеты, хотят оставаться незаметными.Если вы выполняете работу с высокими ставками, где возможна опасность, вы хотите оставаться в безопасности. Привлечение внимания к себе может стать причиной опасного звонка. Так что очень важно защитить себя бронежилетом, который не привлекает внимания. Легкие бронежилеты, например, сделанные в конструкции SAPI, идеально подходят для сохранения низкого профиля . Вы даже можете разместить бронежилеты SAPI в рюкзаках, портфелях или на себе в различных местах.
Вот некоторые из примеров, когда люди, которые работают в помещении и нуждаются в защите своих бронежилетов, как в дизайне SAPI, могут быть следующими:
- Адвокаты вокруг осужденных преступников
- Судьи, занимающиеся громкими делами
- Учителя в школьных округах с насилием
Когда использовать бронежилет ESAPI?
Бронежилет ESAPI , являющийся одним из наиболее важных вставных пластин для бронежилета, отнесен NIJ к типу IV. Этот нательный доспех очень мощный и очень тяжелый. Если вам нужна дополнительная защита, которая также используется на бронированных машинах, ESAPI — отличный выбор. Когда вам может потребоваться дополнительная защита вставками бронежилета ESAPI, некоторые из ситуаций перечислены ниже. Читайте дальше, чтобы узнать больше об опасных условиях, при которых может потребоваться бронежилет, такой как ESAPI, который может снизить баллистику мощной винтовки.
Военный персонал, имеющий дело с вражескими комбатантами
Многие военные заставы перешли из бронежилетов SAPI в ESAPI для всех солдат на театре военных действий много лет назад. Дополнительный вес — ничто по сравнению с типом безопасности, предоставляемой их войскам. Печальная и пугающая правда о вооруженных силах заключается в том, что огонь из крупнокалиберных винтовок — обычное явление и угроза. Военнослужащие активно сражаются с боевиками противника на поле боя. Таким образом, логично, что ESAPI является предпочтительной вставкой для бронежилета, поскольку они сталкиваются с такими серьезными угрозами ежедневно и с любого направления.Войска намного ближе к полностью защищенному бронежилетом ESAPI . Они участвуют в различных ситуациях из-за дополнительной защиты с помощью ESAPI.
Правоохранительные органы в районах с повышенным уровнем преступности или в сельской местности
Правоохранительные органы на улицах могут в любое время столкнуться с мощными винтовками или автоматами. Это дает ESAPI гордость в области правоохранительной деятельности. Хотя такие случаи редки, в некоторых случаях определенно требуется дополнительная безопасность, и это лучше, чем сожалеть.Сельские районы, где проводится охота, могут быть опасными сценариями для сотрудников правоохранительных органов. Бронежилеты ESAPI необходимы для областей, где они являются более мощным оружием, принадлежащим и используемым широкой публикой.
Очевидно, что некоторые мощные охотничьи ружья обычно используются для отдыха. Однако предположим, что мощная винтовка попала не в те руки. В таком случае это оружие превращается в эффективные машины для убийства с высочайшим уровнем опасности для правоохранительных органов.В этих обстоятельствах сотрудникам правоохранительных органов для защиты требуется бронежилет ESAPI.
Как одна из наиболее важных вставок бронежилетов, бронежилет ESAPI имеет рейтинг IV NIJ (Источник).Что такое бронежилеты SAPI и ESAPI, изготовленные из
Бронежилеты SAPI и ESAPI изготовлены из искусственного материала, называемого карбидом бора. Карбид бора сложен и является вторым по прочности искусственным материалом. Карбид бора легко производится в больших количествах и также называется черным алмазом.Единственная проблема бронежилетов из карбида бора — невероятный вес и поломка при ударе.
Сам по себе карбид бора очень эффективен против пистолетов, которые стреляют пулями со скоростью 900 футов в секунду или ниже. Однако пули, выпущенные с более высокой скоростью, имеют тенденцию разрушать карбид бора. Так продолжалось до тех пор, пока ученые не обнаружили, что добавление силикона к карбиду бора значительно усиливает его. Теперь и SAPI, и ESAPI содержат смесь карбида бора и кремния в разных количествах.Бронежилет ESAPI на 27% тяжелее, чем бронежилет SAPI . Хотя оба классифицируются как защитные вставки, ESAPI изготовлен из полиуретановой смеси. SAPI изготавливается из монолита или силиконовой смеси. Оба они легче традиционных керамических бронежилетов, но намного дороже.
Основные сведения о материалах SAPI и ESAPI представляют собой смесь карибского бора с другими более легкими и гибкими материалами. Эти материалы фактически добавили некоторую отдачу пластине бронежилета, что сделало их более устойчивыми к баллистике.Разница между ними заключается в пропорциях карбида бора в каждой смеси, что обеспечивает либо большую прочность в ESAPI, либо гибкость и легкость в SAPI.
Сравнение формы бронежилетов
Конструкции бронежилетов SAPI и ESAPI уникальны по своей конструкции. Бронежилет ESAPI и SAPI является одним из наиболее защитных конструкций бронежилетов. Неудивительно, что многие, кому нужна гибкость и маневренность, не предпочитают ESAPI или SAPI другим конструкциям и видам бронежилетов.
Форма бронежилета SAPI / ESAPI
Бронежилет SAPI и ESAPI имеет форму щита с закругленными углами вверху. По бокам и внизу этого доспеха мало места. Недостаток места по бокам и по углам ESAPI и SAPI ограничивает диапазон перемещения. Отсутствие подвижности связано с конструкцией углов. Квадратные углы, как и в других дизайнах, допускают движение. Однако в этом дизайне углы скруглены, а не в разрезе. Прямоугольная форма нижней половины затрудняет движение нижней части тела.Несмотря на то, что ESAPI и SAPI имеют наибольший охват среди всех разрезов бронежилетов, им сложно двигаться. Вся бронежилет большой и имеет форму щита, как бронежилет ESAPI. Однако верхние углы срезаны сильнее при выстреле стрелка. Эти разрезы на плечах позволяют держать руки для стрельбы, при этом защищая большую часть тела от прямых ударов.
Бронежилет с тройным изгибом Форма
Основанный на той же инновации, что и бронежилет стрелка, бронежилет с тройным изгибом имеет углы, вырезанные для движения. Верхний и нижний углы бронежилета срезаны для большей подвижности плеч и нижней части тела в бедрах. Броня также облегает форму, что удобнее и стабильнее. Такой облегающий нательный доспех имеет изгибы. Крой тройной кривой имеет угол в верхней части груди, вокруг живота и вниз до талии.
Форма нательного доспеха пловца
Этот доспех получил название «пловец» из-за большого диапазона движений, который он обеспечивает во всех углах тела. Форма щита других разрезов бронежилета была заменена ромбовидной и конической. Длинные узкие прорези от середины пластины бронежилета сужаются к верху и обеспечивают максимальный диапазон движений плечевого пояса.
Сравнение формы бронежилетов (Источник).Советы по уходу за бронежилетом
Бронежилеты ESAPI и SAPI, как известно, более хрупкие, чем другие бронежилеты предыдущих поколений.Тем не менее, их сила превосходна, и они, как правило, весят меньше, чем предыдущие поколения. В конце концов, если вы хорошо заботитесь о бронежилете ESAPI и SAPI, вы должны быть лучше защищены от огня, чем пластины бронежилета старой конструкции. Прочтите, чтобы узнать больше о некоторых из лучших советов по уходу за вашими бронежилетами ESAPI и SAPI .
Износ имеет значение больше, чем возраст
Несмотря на то, что бронежилеты, такие как SAPI и ESAPI, имеют одинаковые возрастные ограничения — около пяти лет активной службы, это возрастное ограничение имеет меньшее значение для брони, о которой не заботятся.Бронежилеты SAPI и особенно ESAPI сделаны из материалов, которые имеют тенденцию изнашиваться при небрежном использовании и хранении.
Даже если бронежилет еще находится в пределах того времени, которое считается приемлемым для использования в полевых условиях, он требует постоянного контроля на предмет повреждений . Бронежилет, используемый ежедневно, изнашивается быстрее, чем броня, используемая только изредка, что делает его менее эффективным, чем его редко используемый аналог.
Некоторые из наиболее распространенных повреждений, обнаруживаемых на бронежилете SAPI и ESAPI, которые могут сделать бронежилет менее эффективным при остановке баллистики:
- Видимые вмятины или вмятины, которые можно легко почувствовать
- Складки в материале, которые показывают изменение цвета
- Разрывы в материале
- Запах в материале; это может указывать на то, что ткань намокла, что повреждает и ослабляет ваш бронежилет
- Ожоги, например, от сигарет, пожаров, огнестрельного оружия или других источников тепла
Очистите свой бронежилет и переноску для бронежилета
Грязь, которая попадает в Карманы носителя бронежилета втираются в бронежилет и медленно изнашиваются.Убедитесь, что у вас есть два жилета для переноски бронежилетов: в одном вы носите бронежилет, а другой очищаете в конце предыдущего использования. Вы также хотите, чтобы бронежилет был чистым перед тем, как положить его в новый багажник. Перед тем как положить бронежилеты в карманы переноски, с помощью губки удалите пыль, грязь, ворсинки или другие частицы. Тщательно вытрите бронежилет чистой сухой тканью, а не бумажным полотенцем. Затем вставьте пластины в носитель бронежилета . Чистка бронежилета защищает крошечные волокна материала.Если вы пренебрегаете чисткой бронежилета в перерывах между использованием, вы рискуете сократить срок их службы и подвергнуть свою жизнь опасности.
Оставайтесь в форме, чтобы подойдет бронежилет
Оставаться в форме в качестве офицера правоохранительных органов или солдата — отличная идея в любое время. Однако производители бронежилетов также рекомендуют сохранять постоянный вес. Купив бронежилет нужного размера и подходящего размера, вы не должны набирать вес. Фактически, производители бронежилетов предупреждают, что никто не должен набирать более десяти процентов своей первоначальной массы тела при ношении бронежилетов.
Из-за лишнего веса бронежилет плохо подходит. Плохая подгонка бронежилета означает, что вам неудобно, а бронежилет плохо защищает ваши жизненно важные органы. Сделайте себе одолжение и оставайтесь в форме, регулярно нося бронежилеты. Если вы начинаете замечать, что оно становится слишком напряженным, как можно скорее возвращайтесь в спортзал! В противном случае ваши жизненно важные органы могут быть обнажены, и вы застрянете в дорогих и неудобных бронежилетах.
Очистка бронежилета
В заключение
Защита, которую вы получаете от бронежилета, спасет вашу жизнь, если вы позволите ей.Бронежилеты SAPI на протяжении многих лет были одним из самых надежных типов бронежилетов во всем мире. Однако все изменилось, когда он был обновлен до ESAPI, который военные приняли повсеместно. Усиленная защита от огня мощных винтовок и баллистическая классификация IV NIJ в конструкции ESAPI — необходимое преимущество, которого заслуживают военнослужащие. Надеюсь, после прочтения этой статьи вы выберете бронежилет типа , подходящий для вашей ситуации. Тем не менее, мы надеемся, что вы будете в безопасности и будете информированы о выборе бронежилета, чтобы ваша жизнь стала лучше, ваша работа лучше и ваше душевное спокойствие было лучше.
Что такое SAPI и ESAPI Body Armour?
В сфере бронежилетов используется много жаргона и аббревиатур, что может сбить с толку людей, которые плохо знакомы с этой темой. В частности, нас часто спрашивают о разнице между SAPI, ESAPI, стрелками и пловцами. Хотя эти типы бронежилетов обладают общими баллистическими качествами, есть несколько ключевых различий, включая форму и размер. Когда вы хотите купить бронежилеты, важно точно знать, что вы получаете.В этой статье мы собираемся изучить ключевое различие между вышеупомянутыми пластинами бронежилета и дать небольшую справку по каждому из них.
SAPI = Защитная вставка для стрелкового оружия
Как показано выше, SAPI означает защитную вставку для стрелкового оружия. Важно отметить, что пластины SAPI появились в вооруженных силах США как средство классификации бронежилетов, предназначенных для использования в стандартных держателях табличек. Бронеплиты корпуса SAPI, выпущенные военными, изготовлены из композитных керамических материалов (а именно карбида кремния) и рассчитаны на 7 упоров.62 х 51 (M80 BALL) патрон. С точки зрения уровня защиты от угроз NIJ бронежилеты SAPI будут классифицироваться как уровень III в соответствии с действующими стандартами 0101.06. Если вы не знакомы с уровнями защиты от угроз NIJ, вы можете узнать больше об этом в этой статье.
ESAPI = усовершенствованная защитная вставка для стрелкового оружия
В 2005 году военные США начали поэтапный отказ от бронежилетов SAPI в пользу пластины ESAPI или «усовершенствованной защитной вставки для стрелкового оружия». Это новое поколение бронежилетов было разработано в соответствии со спецификациями NIJ level IV, рассчитанными на остановку.30-06 патронов M2AP (AP — Armor Piercing). По сравнению с пластинами SAPI, пластины ESAPI идентичны по размеру и форме. Однако стоит отметить, что пластины ESAPI также примерно на 27% тяжелее пластин SAPI. Пластины ESAPI обычно изготавливаются из высококачественной керамики из карбида бора, которая даже используется для некоторых бронированных машин, таких как танки.
Форма: SAPI / ESAPI vs Shooters Cut vs Swimmers Cut
Изображение ниже иллюстрирует разницу между стандартной формой бронежилета SAPI / ESAPI и более продвинутыми формами пластин, которые может предложить Spartan Armor Systems ™.Как видите, традиционный дизайн пластин SAPI — это очень простой дизайн пластин. Несмотря на то, что такой подход без излишеств выполняет свою работу, те, кто носил пластины SAPI, могут подтвердить определенные ограничения, синонимичные с пластинами SAPI. Например, пластины SAPI, как правило, имеют больше материала в области плеча, что может сделать винтовку неудобной или неестественной. Напротив, бронежилет стрелков имеет немного меньше материала в области плеч, что обеспечивает больший диапазон движений и более естественное ощущение при использовании винтовки на плече.На противоположном конце спектра находится дизайн кроя пловца, который обеспечивает полный диапазон движений в плечах. Еще одно улучшение, заслуживающее внимания, — это форма нижних углов нашего бронежилета Spartan AR550. В то время как дизайн SAPI может прекрасно себя чувствовать в положении стоя, в нижних углах становится очень неудобно сидеть или приседать. Дизайн Spartan AR550 Shooters Cut был создан для предотвращения большей части эффекта «копания» за счет удаления острых нижних углов пластины.Для дальнейшего повышения комфорта и эргономики наших бронежилетов Spartan Armor Systems ™ предлагает запатентованную конструкцию Advanced Triple Curve ™ (ATC), которая доступна для наших бронежилетов Spartan Omega ™ AR500 и Spartan AR550 со стальным сердечником.
Сравнение размеров пластин
В то время как коммерческие бронежилеты изготавливаются стандартных размеров, таких как 8 «x10», 10 «x12» и 11 «x14», оригинальные размеры пластин SAPI следовали другому методу определения размеров, чтобы соответствовать конкретным стандартным держателям пластин, для которых они были разработаны. .Хотя пластины SAPI могут быть адаптированы к размеру пользователя, производство такого количества размеров может быть коммерческой проблемой. Еще одно важное соображение заключается в том, что размеры большинства жизненно важных органов примерно одинаковы для большинства людей, и только очень низким и очень высоким людям нужны пластины, которые отличаются от обычных 10 x 12 дюймов. На самом деле, очень часто клиенты, которые изначально считают, что им нужны пластины размером 8 x 10 или 11 x 14 дюймов, обнаруживают, что пластины размером 10 x 12 дюймов подходят им гораздо лучше.Хотя это не в 100% случаев, это случается чаще, чем нет. Наконец, важно отметить, что коммерчески производимые пластины среднего размера SAPI / ESAPI обычно имеют размер 10 x 12 дюймов, несмотря на то, что их военные аналоги имеют размер 9,5 x 12,5 дюймов. Держатели пластин производства Spartan Armor Systems ™ могут принимать пластины SAPI, выпущенные военными, несмотря на добавленную высоту 0,5 дюйма.
Размеры пластин SAPI / ESAPI | Торговая тарелка, размеры |
|
|
Сопутствующие товары
Подводя итог, пластины бронежилетов SAPI и ESAPI представляют собой классификацию брони, используемую для определения конкретного размера, формы и профиля защиты от угроз бронежилетов, выпущенных военными.Несмотря на то, что дизайн пластины SAPI имеет много общего с дизайном, имеющимся в продаже на сегодняшний день, дизайн огранки «стрелок» имеет некоторые особые преимущества, когда речь идет о комфорте и диапазоне движений в плечах. У вас есть вопросы о бронежилетах или тактическом снаряжении? Мы всегда рады ответить на ваши вопросы и помочь выбрать защитное снаряжение, которое подходит именно вам. Не стесняйтесь обращаться к нам!
Свяжитесь с нами:
Вилла Пондок Сапи | Убуд Вилла с 4 спальнями
Вилла Pondok Sapi — Вилла в Убуде
Villa Kelusa — это сочетание двух вилл, Villa Pondok Sapi и Villla Pondok Surya, расположенных на небольшой вилле Kelusa, всего в 15 минутах езды от Убуда.Несмотря на то, что Келуса находится в отдаленном месте и не тронут современной жизнью, до нее легко добраться и всего в нескольких минутах ходьбы от множества развлечений в Убуде. Вилла находится в 10 минутах езды от Сафари-парка на слонах и в 1,5 часах езды от международного аэропорта Нгурах-Рай.
Пондок Сапи, что означает «павильон коровы», назван в честь вездесущих балийских навесов с соломенной крышей, которые усеивают джунгли и укрывают фермеров на рисовых террасах. Вилла Пондок Сапи была спроектирована как частная резиденция американского писателя и тележурналиста на пенсии.Вилла Pondok Sapi состоит из трех отдельных зданий. Главный павильон содержит изысканную кухню, столовую и гостиную с захватывающим видом на каньон Пакусеба, полностью оборудованную ванную комнату и закрытую мультимедийную комнату с кондиционером, которую можно превратить в роскошную спальню.
Следующее здание — это стеклянный дом с кондиционерами, двухэтажная студия со стеклянными стенами, библиотекой и двумя просторными главными спальнями с двуспальными кроватями. Самое северное здание — это открытый бассейн Cabana с частным пейзажным бассейном и зоной отдыха, с выходом на большую ландшафтную лужайку и сад камней.Все здания расположены на вершине хребта, над выложенными плиткой рисовыми полями, которые спускаются каскадом по огромному крутому ущелью к реке Пакусеба и выходят на запад, чтобы максимизировать потрясающий вид на закат над девятью древними вулканами.
Спальни на Вилле Пондок Сапи
На вилле две спальни с кондиционерами. Оба находятся в Glass House — двухуровневом спальном павильоне виллы — по одной спальне на каждом уровне. В обеих спальнях есть кровати размера «king-size», а также отдельные ванные комнаты. В спальне второго уровня прямо в спальне установлена отдельно стоящая ванна.В ванной комнате на первом этаже есть встроенная ванна. Обе спальни также имеют потрясающий вид на зеленый пейзаж.
Жилые помещения на вилле Пондок Сапи
Внутренние помещения
Есть две жилые зоны — одна в плавательном павильоне, а другая в центральном павильоне виллы. Вокруг тщательно выбранных встреч вы все сможете провести увлекательную беседу. В другой половине полуоткрытого, просторного, свежего центрального павильона с высокими потолками находится обеденная зона с деревянным деревянным столом на шесть человек.Здесь вы можете попробовать настоящую местную кухню, а также блюда иностранной кухни, тщательно приготовленные шеф-поваром на полностью оборудованной кухне для гурманов в центральном павильоне. Есть также две медиа-комнаты — в центральном павильоне и в спальном павильоне виллы — где вы все можете ждать следующего эпизода новейшего популярного сериала. Или отправляйтесь в марафон из классических фильмов, которым всегда мало.
Открытые площадки
На фасаде плавательного павильона виллы находится пейзажный бассейн.Прыгните в его гостеприимные, прозрачные воды и пройдите вброд к живописному краю, где вы не сможете не задержаться — завороженные — глядя на рисовые террасы, долину реки и далекие девять вулканов. Поднявшись над водой, вы можете полежать на мягких, эргономичных лежаках на каменной террасе у бассейна.
Услуги и удобства
- Спальни с кондиционером
- Кухня
- Частный бассейн
- Спутниковое ТВ
- DVD-проигрыватель
- Бесплатный Wi-Fi
- Сейф в номере
- Док-станция для iPod
Включение
- Одноразовый трансфер из аэропорта и обратно
- Ежедневный завтрак
- Приветственный напиток
- Бесплатный ежедневный трансфер до Убуда и обратно
- Бесплатный послеобеденный чай у бассейна
- Подключение к Интернету
- Служба кадров
Тарифы
Спальни | Низкий сезон | Высокий сезон | Пик сезона |
2 спальни | 395 | 495 | 906 21 595 90 284|
4 спальни Kelusa / комплекс | 906 21 595 90 284795 | 895 |
* Ставка облагается 15-процентным государственным налогом и налогом на услуги.Обратите внимание, что указанные выше цены действительны до 31 марта 2020 года. Если вы хотите забронировать номер после этой даты, напишите нам по электронной почте.
Период сезона
Низкий сезон | Высокий сезон | Пик сезона |
Все остальные даты | 01 июля — 31 июля 01 сентября — 15 сентября Пасхальная неделя Китайский Новый год | 01 августа — 31 августа 20 декабря — 08 января |
Пондок Сапи | Бали | 2 спальни
Дополнительная информация
- Расположение: Келики, Тегаллаланг, Кабупатен Гианьяр, Бали, телефон + (0361) 4710447
Профессор Университета Нью-Хейвена добивается больших успехов в борьбе с болезнью Лайма, исследования рака
Всемирно признанный эксперт по болезни Лайма, Ева Сапи, доктор философии.Д., сделал революционные открытия в лаборатории, которые пролили свет на бактерии, вызывающие заболевание, а также на возможную связь между болезнью Лайма и другим в значительной степени неизвестным и все более распространенным заболеванием: раком груди.
15 сентября 2020
Рене Чмиэль, Управление маркетинга и коммуникаций
Студенты доктора Евы Сапи были неотъемлемой частью ее исследования.
Ева Сапи, доктор философии, долгое время находилась на передовой в поисках лекарства от болезни Лайма — болезни, которой она сама заразилась несколько лет назад.
Директор университетской исследовательской группы болезни Лайма, доктор Сапи — всемирно признанный эксперт по этому заболеванию, которое Центры по контролю и профилактике заболеваний считают наиболее распространенным трансмиссивным заболеванием в Соединенных Штатах. Это вызвано бактерией Borrelia burgdorferi и обычно распространяется клещами.
Доктор Сапи говорила со средствами массовой информации по всей стране, включая CNN, предупреждая об «идеальном шторме» в этом году для болезни Лайма, учитывая пандемию COVID-19 и мягкую зиму, которая, по ее словам, способствовала «плохому для клещей году». . »
Слева направо: Мин Чжан ’20 М.С., Гаури Гаур ’20 М.С., Ева Сапи, доктор философии, и Анкита Чаван ’22 М.С.Обученный исследователь рака груди, доктор Сапи провела 15 лет, проводя исследования рака груди и яичников в Йельском университете, прежде чем переключить свое внимание на болезнь Лайма.Эти две области исследований могут быть связаны более тесно, чем считалось ранее, и в настоящее время она изучает возможную связь между раком груди и болезнью Лайма.
«Я слышал о людях, которые страдали от болезни Лайма, а вскоре после этого получили диагноз рака груди, — сказал доктор Сапи, координатор университетской программы по клеточной и молекулярной биологии. «Мне было интересно, были ли бактерии Borrelia в ткани рака груди. Моя исследовательская группа изучила слайды с несколькими видами рака груди, а также со здоровыми тканями.Нормальные ткани груди были полностью отрицательными для бактерий, и мы нашли доказательства их присутствия в тканях рака груди. Более того, когда мы познакомили боррелии с раковыми клетками, мы обнаружили, что они очень быстро начинают вторгаться ».
«Выступление на конференции было большим опытом»
Хотя этиология рака молочной железы до сих пор неизвестна, считается, что он вызван сочетанием генетических факторов и факторов окружающей среды, один из которых, по мнению доктора Х.Сапи считает, что это может быть бактериальная инфекция. Она и ее ученики, которые были неотъемлемой частью ее исследований, сосредотачиваются на Боррелии. При исследовании более 400 тканей инвазивного рака груди они обнаружили, что значительное количество проб были положительными на боррелии, что позволяет предположить, что бактерии могут играть роль в развитии рака груди и метастазировании.
Ева Сапи и Сэм Сорбелло.Доктор Сапи и несколько ее учеников, в том числе Минь Чжан ’20 М.С. и Гаури Гаур ’20 М.С. — представил свое исследование, посвященное изучению возможной связи рака груди и болезни Лайма и разработке новой модельной системы для боррелий на прошлогодней конференции Международного общества Лайма и ассоциированных болезней.
Гаур и Чжан, недавно окончившие аспирантуру университета по клеточной и молекулярной биологии, работали в тесном сотрудничестве с доктором Сапи в рамках исследовательской группы по болезни Лайма. Гаур был ведущим аспирантом в проекте по раку груди, а Чжан разработал модель рыбок данио для бактерий болезни Лайма.
«Модель зебры позволяет проводить быстрый, неинвазивный анализ бактерий болезни Лайма в реальном времени», — сказала она. «Эта модель на животных показывает потенциал для расширения нашего понимания взаимодействия между факторами вирулентности бактерий и механизмами защиты хозяина в патогенезе боррелий. Выступление на конференции было отличным опытом и позволило мне получить отзывы от коллег-профессионалов ».
«Я надеюсь, что это исследование позволяет взглянуть на все виды рака с другой точки зрения»
Доктор.Пилотное исследование Сапи и ее студентов было поддержано Pink Clover, Фондом рака груди Коллин Сорбелло, который был основан благотворителем университета Сэмом Сорбелло в честь его покойной жены Коллин. Университетская исследовательская лаборатория Коллин Сорбелло в Доддс-Холле также носит имя Коллин, умершей от рака груди.
«Рак настолько неоднороден», — сказал д-р Сапи. «Если вы убьете одну популяцию, другая вернется. Это напоминает мне бактерии — вы можете убить большинство из них, но вам нужно принимать антибиотик в течение десяти дней, иначе они вернутся.Здесь так много параллельных линий. Я надеюсь, что это исследование позволяет взглянуть на все виды рака с другой стороны, а не только на рак груди ».
Цель доктора Сапи — определить антибактериальные агенты, которые эффективны в уничтожении всех форм бактерий. Она обнаружила, что боррелии могут образовывать вокруг себя защитный слой — биопленку, что позволяет им противостоять антибиотикам. Она и ее ученики также обнаружили, что жидкий экстракт цельнолистной стевии уменьшил массу биопленки примерно на 40 процентов, и они продолжают исследовать это как возможное замечание.
«Наука может быть интересной и увлекательной»
Доктор Сапи провел пять лет, проводя исследования с экспертом из Колумбийского университета, помогая в исследовании, которое было сосредоточено на женщине из Нью-Йорка, у которой был положительный результат теста на болезнь Лайма и которая получала антибактериальную терапию в течение 16 лет. Несмотря на то, что женщина принимала множество комбинаций антибиотиков, у женщины были серьезные осложнения, в том числе судороги, и, в конце концов, она умерла от болезни. Исследователи секвенировали все в ее тканях, обнаружили боррелии и подтвердили, что бактерии могут образовывать биопленку, что позволяет им противостоять антибиотикам.Исследование доктора Сапи было опубликовано в журнале Antibiotics .
В дополнение к своей работе на переднем крае исследований болезни Лайма и рака груди, доктор Сапи стремится поделиться своей страстью к исследованиям со своими учениками, а также обучать и вдохновлять исследователей будущего.
«Я всегда стараюсь, чтобы проекты студентов вызывали у них энтузиазм и увлеченность наукой», — сказала она. «Я знаю, что они будут в лаборатории долгие часы, и я хочу, чтобы они захотели быть там.Как наставники, мы должны вдохновлять и показывать им, что наука может быть интересной и увлекательной ».
Разработка метода редактирования плазмид, опосредованных разрезом SapI / AarI
Abstract
Плазмидная инженерия и молекулярное клонирование — практически повсеместный инструмент в биологии. Хотя были разработаны различные методы лигирования молекул ДНК или направленного мутагенеза плазмид, каждый имеет свои ограничения. Многие из широко используемых лабораторных стратегий неэффективны, тогда как имеющиеся в продаже наборы довольно дороги и часто специализируются на очень специфических обстоятельствах.Здесь мы описываем метод редактирования плазмиды, опосредованного разрезом SapI / AarI (SIMPLE), который позволяет пользователям выполнять сайт-направленный мутагенез, делеции и даже короткие вставки в любую плазмиду в одной реакции ПЦР, используя только один рестрикционный фермент. Кроме того, метод SIMPLE может быть адаптирован для вставки фрагмента ДНК любого размера в вектор с использованием подхода двухэтапной ПЦР и может использоваться для лигирования любого количества фрагментов ДНК с несовместимыми концами в желаемом конкретном порядке. Метод SIMPLE предоставляет исследователям эффективный и мощный инструмент с широким спектром приложений для молекулярного клонирования.
Ключевые слова: Сайт-направленный мутагенез, молекулярное клонирование, эндонуклеаза рестрикции, вставки и делеции генов, плазмида. Эффекторные нуклеазы TAL 2 и CRISPR 3 , редактирование плазмид на основе ПЦР остается одним из наиболее важных инструментов в исследованиях молекулярной биологии. Использование плазмид для анализа функции генов часто проще и предпочтительнее мутации геномных последовательностей, так как процесс редактирования ДНК может быть выполнен полностью in vitro .Это позволяет секвенировать всю плазмиду перед ее введением в клетки для обеспечения точности и позволяет избежать возможности вторичных нежелательных мутационных событий, которые являются общей проблемой, связанной с методами редактирования генома 4 . Кроме того, экспрессия интересующего гена на основе плазмиды позволяет выполнить тонкую настройку, поскольку исследователи могут клонировать желаемый промотор перед геном. Кроме того, плазмиды часто используются для получения интересующего белка в гетерологичном организме или in vitro .
Здесь мы описываем новый подход для выполнения множества различных модификаций любой плазмиды с использованием одной реакции ПЦР и одного рестрикционного фермента. Наш метод, называемый здесь ПРОСТОЙ (редактирование плазмиды, опосредованное разрезом SapI / AarI), можно использовать для сайт-специфического мутагенеза, делеций любого размера и коротких вставок (до 30 пар оснований). Кроме того, метод SIMPLE может быть адаптирован для лигирования любого количества фрагментов ДНК в желаемом порядке. Одним из самых больших преимуществ метода SIMPLE является то, что соединение лигирования между двумя фрагментами может быть идеально «зашито», предотвращая попадание нежелательных нуклеотидов / аминокислот, что является общей проблемой для стандартных методов клонирования ДНК.В качестве доказательства концепции метода SIMPLE мы сделали две отдельные точечные мутации, частичную делецию и вставили эпитоп FLAG в ORF Schizosaccharomyces pombe ade6 + , клонированную в pUC19. Наши результаты показывают, что этот метод очень эффективен и специфичен, и поэтому ПРОСТОЕ клонирование должно стать ценным методом конструирования и редактирования плазмид для исследователей клеточной и молекулярной биологии.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Хотя для целевого сайт-специфического мутагенеза, делеций и небольших вставок плазмидной ДНК было разработано множество различных методов, ни один доступный в настоящее время подход не может произвести все эти изменения в одной реакции ПЦР. , 6,7 .В нашем методе мы использовали уникальные характеристики пары рестрикционных ферментов типа II, SapI и AarI 8 . Оба эти фермента обладают несколькими свойствами, которые делают их подходящими для метода ПРОСТОЙ (кратко изложено в). Во-первых, оба имеют последовательности распознавания из 7 пар оснований, что делает их участки вырезания относительно нечастыми в обычно используемых векторах клонирования. Во-вторых, они разрезают 3′-сторону своего сайта узнавания, а не позицию, в которой они связываются. В-третьих, что наиболее важно, нет ограничений для разрезаемой последовательности (Ns), что позволяет генерировать выступ любой последовательности.
Дизайн праймера для введения точечных мутаций с использованием AarI и SapI. (A) Сайты узнавания и образцы разрезов для рестрикционных ферментов SapI и AarI. (B) Гипотетическая последовательность, которая будет нацелена на мутагенез. (C) Праймеры, которые можно использовать для мутации последовательности, показанной в (B) , с помощью метода SIMPLE с использованием фермента SapI.
Мы предположили, что, используя эти свойства SapI / AarI, мы сможем редактировать определенные нуклеотиды в любой плазмиде с помощью ПЦР.В качестве примера мы показываем частичную гипотетическую последовательность ДНК на плазмиде с одним нуклеотидом, который будет нацелен на мутагенез, выделенным красным (). Праймеры должны быть сконструированы так, чтобы содержать 3–4 нуклеотидную спейсерную последовательность на их 5′-конце, за которой следует сайт узнавания SapI (или AarI), затем 1 (для SapI) или 4 (для AarI) нуклеотида спейсерной последовательности. Непосредственно после этого спейсера имеется до 3 (для SapI) или 4 (для AarI) нуклеотидов, которые могут быть сконструированы таким образом, чтобы они содержали любую последовательность.Наконец, оставшиеся ~ 25 нуклеотидов будут использоваться для нацеливания праймеров на соответствующие сайты для амплификации ПЦР. Конкретные шаги по созданию праймеров описаны в.
ПЦР-амплификация плазмиды с использованием нашей схемы конструирования праймеров приведет к получению линеаризованной полноразмерной версии плазмиды, фланкированной желаемой точечной мутацией и сайтами SapI / AarI как на 5 ‘, так и на 3’ концах. Этот продукт ПЦР затем может быть переварен подходящим ферментом, образуя пару совместимых выступов, которые при лигировании вместе будут восстанавливать исходную плазмиду, содержащую желаемую мутацию ().Точно так же этот подход можно модифицировать для удаления любой части плазмиды без необходимости в конкретных сайтах рестрикционных ферментов, создавая идеальную последовательность без каких-либо «шрамов», оставшихся после разрезания и лигирования. Для выполнения делеции праймеры для ПЦР будут сконструированы таким же образом, как указано выше, но сделаны комплементарными последовательностям, фланкирующим желаемый сайт делеции. Этапы ПЦР, расщепления и лигирования идентичны тем, которые используются для мутагенеза ().
Схематическая диаграмма, показывающая, как можно использовать метод SIMPLE для выполнения (A), сайт-направленного мутагенеза и (B) делеции в плазмиде.Желаемая последовательность, которая будет нацелена либо на мутагенез, либо на делецию, помечена буквой Y на обеих фигурах, в то время как желаемая нуклеотидная замена помечена буквой Z, а последовательности, фланкирующие сайт делеции, помечены буквами A и B.
В качестве доказательства В принципе, мы решили использовать метод SIMPLE для создания двух отдельных точечных мутаций (A46 → G и C1466 → T) и частичной делеции (601-1101) S. pombe ade6 + ORF с использованием как SapI, так и AarI. Короткая последовательность соответствующей области для мутации C1466 → T показана на.Смена A46 → G не показана. Чтобы определить эффективность нашего метода, мы секвенировали 5 возможных клонов от каждой мутации и делеции и обнаружили, что наш метод имел показатель успеха 80% (). Мы также проверили несколько потенциальных клонов на предмет делеции расщеплением рестриктазой с последующим гель-электрофорезом ().
Доказательство принципа ПРОСТОГО метода. (A) Хроматограф с секвенированием по Сэнгеру , показывающий направленную сайт-специфическую мутацию в гене S. pombe ade6 + , где C 1466 был заменен на T.Изменение A46 → G не показано. (B) Сводка всех попыток мутаций и делеций с использованием метода SIMPLE. Для всех методов мы отобрали 5 плазмид. (C) Агарозный гель, демонстрирующий целевую делецию 500 пар оснований ORF ade6 + . M, маркеры размера; 1–10, проверенные делеции; C — контрольная плазмида. Плазмиду разрезали EcoRI, которая разрезает три раза: по обе стороны от гена ade6 + (высвобождая фрагмент ade6 ) и еще раз (высвобождая фрагмент 1 и остов плазмиды).Мы отобрали 10 кандидатов с удалением. Обратите внимание на более короткий фрагмент ade6 .
Метод SIMPLE также может быть адаптирован для внесения небольших вставок за один этап ПЦР. Обычно желательно клонировать небольшие эпитопы, такие как HA, MYC или FLAG, чтобы пометить ген, клонированный в плазмиде. Однако исследователи часто сталкиваются с проблемой отсутствия удобного сайта рестрикции в желаемом положении или невозможности клонировать свой тег в правильной рамке считывания. Метод SIMPLE позволяет обойти все эти проблемы, поскольку нет никаких ограничений на расположение вырезанных сайтов.В качестве доказательства концепции мы вставили эпитоп FLAG в точно определенное положение в пределах ORF ade6 + . Как и раньше, праймеры были сконструированы так, чтобы содержать спейсер, за которым следовали сайт узнавания фермента, дополнительный спейсер, затем половину эпитопа FLAG (на праймер) и, наконец, гомологичную последовательность нацеливания (фиг. S1). После ПЦР-амплификации, расщепления и лигирования два совместимых конца генерируют тег FLAG в надлежащей рамке считывания.
Уникальные свойства SapI и AarI также можно использовать для лигирования вместе нескольких больших фрагментов ДНК в любом желаемом порядке.Каждый фрагмент можно амплифицировать с помощью праймеров, которые при расщеплении будут содержать определенный выступ. Путем создания пар совместимых выступов несколько фрагментов могут быть «сшиты» вместе для создания плазмиды (рис. S2). Теоретически этот подход можно использовать для создания 4 3 = 64 уникальных выступов с использованием SapI и 4 4 = 256 уникальных выступов с использованием AarI. Однако для оценки практической осуществимости этой концепции необходимо провести дополнительную работу.
Наконец, мы предлагаем использовать дополнительные ферменты с аналогичными свойствами для выполнения метода ПРОСТОЙ.Мы решили использовать SapI и AarI для этого исследования, поскольку их последовательность распознавания из 7 пар оснований относительно редка и не встречается в наших плазмидах.